जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

कोशिका प्रत्यारोपण के लिए चूहे के मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं का डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में ट्रांस-विभेदन

रयान एम वेल्चको, ट्रैविस डी हुल्स, सबरीना एस डिफेनबाक, गैब्रिएल पी शाल, हुओ वांगजिंग, लेस्ली आर सिगल, जेरेड आर वाटर्स, लेवेक टी जेवियर, मिंग लू, जूलियन रॉसिग्नोल, माइकल आई सैंडस्ट्रॉम और गैरी एल डनबार

उद्देश्य: पीडी रोगियों के स्ट्रिएटा के भीतर मानव भ्रूण डोपामिनर्जिक पूर्वजों के प्रत्यारोपण ने उत्साहजनक परिणाम प्रदान किए हैं, लेकिन नैतिक चिंताएं और ऊतक की उपलब्धता इस दृष्टिकोण को सीमित करती है। मेसेनकाइमल स्टेम सेल (MSCs) का उपयोग कोशिकाओं का एक आसानी से उपलब्ध स्रोत प्रदान करता है, क्योंकि वे वयस्क ऊतक से प्राप्त होते हैं। इस इन विट्रो अध्ययन ने एकल एडेनोवायरस का उपयोग करके DA न्यूरोनल प्रेरण के लिए सेल स्रोत के रूप में MSCs के उपयोग की खोज की।
विधियाँ: हमारी प्रयोगशाला ने कई वायरल 2A जीनों को व्यक्त करने वाला एक नया एडेनोवायरस विकसित किया, जो DA न्यूरॉन विभेदन में शामिल प्रतिलेखन कारकों के लिए कई जीनों (Ascl1, Lmx1a, और Nurr1) की पॉलीसिस्ट्रोनिक अभिव्यक्ति की अनुमति देता है और संक्रमण को ट्रैक करने के लिए ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (gfp) के जीन का उपयोग करता है। MSCs को एडेनोवायरस के साथ संवर्धित किया गया, फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी द्वारा साक्ष्य के रूप में gfp की अभिव्यक्ति के साथ-साथ रूपात्मक परिवर्तनों की निगरानी की गई। संक्रमित कोशिकाओं में वायरल डीएनए की मौजूदगी की पुष्टि पीसीआर, इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री और आरटीपीसीआर से की गई।
परिणाम: एडेनोवायरस के साथ संवर्धित एमएससी में रूपात्मक परिवर्तन हुए और साथ ही फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी द्वारा प्रमाणित जीएफपी की अभिव्यक्ति भी हुई। संक्रमित कोशिकाओं में वायरल डीएनए की मौजूदगी की पुष्टि पीसीआर से की गई। इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री और आरटी-पीसीआर विश्लेषण से पता चला कि जीएफपी व्यक्त करने वाली कोशिकाओं में अनुवादित प्रतिलेखन कारक एलएमएक्स1ए और एनयूआरआर1 की न्यूक्लियर सह-लेबलिंग है, साथ ही इन जीनों का अप-रेगुलेशन है, साथ ही डाउनस्ट्रीम जीन लक्ष्यों जैसे कि टायरोसिन हाइड्रॉक्सिलेज (टीएच) और डोपामाइन ट्रांसपोर्टर (डीएटी) का अप-रेगुलेशन भी है।