जैव रसायन एवं विश्लेषणात्मक जैव रसायन

अमूर्त

माइटोकॉन्ड्रिया में ROS उत्पादन पर कैल्शियम के प्रभाव की निगरानी के लिए जांच के रूप में डाइक्लोरोफ्लोरोसेन का उपयोग

ओल्गा वी अकोपोवा, ल्यूडमिला कोलचिंस्काया और वेलेंटीना नोसार

डाइक्लोरोफ्लोरेसिन (DCF) का व्यापक रूप से कोशिकाओं और पृथक माइटोकॉन्ड्रिया में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (ROS) के उत्पादन की निगरानी के लिए उपयोग किया जाता है। हमारा उद्देश्य पृथक माइटोकॉन्ड्रिया में Ca2+ परिवहन के साथ ROS गठन की निगरानी के लिए DCF के उपयोग के विभिन्न तरीकों की तुलना करना था। ROS उत्पादन पर Ca2+ के प्रभावों का अध्ययन चूहे के मस्तिष्क और यकृत माइटोकॉन्ड्रिया में DCF अनुप्रयोग के दो तरीकों का उपयोग करके किया गया था: पहला DCF अग्रदूत डाइक्लोरोफ्लोरेसिन डायसेटेट (DCFDA) के साथ स्टॉक माइटोकॉन्ड्रियल निलंबन का प्रीलोडिंग था, और दूसरा DCFDA के एलिक्वॉट्स को सीधे ऊष्मायन माध्यम में जोड़ना था। कैल्शियम ने साइटोक्रोम सी की क्रमिक रिहाई और इलेक्ट्रॉन प्रवाह के गेटिंग के कारण स्थिर-अवस्था और गैर-संतुलन स्थितियों के तहत मस्तिष्क और यकृत माइटोकॉन्ड्रिया में ROS उत्पादन में वृद्धि की। DCF-प्रीलोडेड माइटोकॉन्ड्रिया का उपयोग करके हमने दिखाया है कि स्थिर अवस्था की स्थितियों के तहत ROS गठन की दर Ca2+-चक्रण और Ca2+-उत्तेजित श्वसन की दर पर रैखिक रूप से निर्भर थी। गैर-संतुलन अवस्था में संक्रमण के परिणामस्वरूप ROS गठन में गैर-रैखिक वृद्धि हुई, जिसने भी Ca2+ सांद्रता पर निर्भरता प्रदर्शित की। जबकि DCF-प्रीलोडेड माइटोकॉन्ड्रिया में DCF प्रतिदीप्ति ने Ca2+ परिवहन के समय का बारीकी से पालन किया, अनलोडेड माइटोकॉन्ड्रिया में जांच लोडिंग ने मैट्रिक्स स्पेस में DCF सांद्रता के निरंतर परिवर्तन के कारण ROS गठन का पता लगाने में बाधा उत्पन्न की। प्रयोगों के आधार पर, हम इस निष्कर्ष पर पहुंचे कि माइटोकॉन्ड्रिया में प्रीलोडेड DCF, ROS उत्पादन पर Ca2+ परिवहन के प्रभावों की निगरानी के लिए एक उपयुक्त जांच के रूप में काम कर सकता है।