जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

फैब्री डिजीज माउस मॉडल से प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाओं का सफल प्रेरण: सुरक्षित लेंटिवायरल जीन थेरेपी के विकास की ओर

मकोतो योशिमित्सु, कोजी हिगुची, नाओमिची अरिमा, जेफरी ए मेडिन और तोशीहिरो ताकेनाका

प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम (iPS) कोशिकाओं को अब ऑटोलॉगस प्रत्यारोपण के माध्यम से कोशिका मरम्मत के लिए एक मूल्यवान उपकरण के रूप में पहचाना जाता है। ये कोशिकाएँ ट्रांसक्रिप्शनल कारकों Oct-3/4, Klf4, और Sox2 के प्रेरण के माध्यम से दैहिक कोशिकाओं से प्राप्त की जा सकती हैं। इस अध्ययन में, हमने एक α-गैलेक्टोसिडेस A-नॉकआउट माउस, एक प्रसिद्ध फैब्री रोग माउस मॉडल के टेल-टिप फाइब्रोब्लास्ट से iPS कोशिकाओं को सफलतापूर्वक स्थापित किया। इन फैब्री-iPS कोशिकाओं ने एक भ्रूण स्टेम (ES) सेल फेनोटाइप का प्रदर्शन किया, जिसकी विशेषता SSEA-1 की अभिव्यक्ति, बढ़ी हुई क्षारीय फॉस्फेट गतिविधि, रेट्रोवायरल-ट्रांसजीन की चुप्पी और भ्रूण शरीर (EB) गठन है। नग्न चूहों में फैब्री-iPS कोशिकाओं के उपचर्म टीकाकरण के परिणामस्वरूप टेराटोमा गठन हुआ। 6वें दिन, विभेदन मीडिया में EBs ने हेमटोपोइएटिक वंश-विशिष्ट जीन अभिव्यक्ति दिखाई। इसके अलावा, हमने 5-7 दिनों तक OP9 स्ट्रोमा कोशिकाओं पर संवर्धित EBs के स्वतःस्फूर्त संकुचन को देखा। RT-PCR ने प्रदर्शित किया कि विभिन्न हृदय मार्कर जीन, जैसे कि Nkx2.5, Gata4, Tnnt2 (कार्डियक ट्रोपोनिन T), और Mlc2a, नियंत्रण फीडर कोशिकाओं की तुलना में फैब्री iPS कोशिकाओं की विभेदन संस्कृतियों में अधिक अभिव्यक्त हुए। जीन थेरेपी के लिए उनके संभावित उपयोग का आकलन करने के लिए, फैब्री रोग के लिए उपचारात्मक जीन, α-गैलेक्टोसिडेस-A cDNA के साथ फैब्री-iPS कोशिकाओं का लेंटिवायरल ट्रांसडक्शन किया गया। इस ट्रांसडक्शन के परिणामस्वरूप इंट्रासेल्युलर और स्रावित α-गैलेक्टोसिडेस A गतिविधि में वृद्धि हुई। ES सेल-विशिष्ट जीन अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल ट्रांसडक्शन के 30 दिनों से अधिक समय तक लेंटिवायरल चिकित्सीय जीन स्थानांतरण द्वारा अपरिवर्तित रही। ये निष्कर्ष प्रदर्शित करते हैं कि फैब्री-iPS कोशिकाएँ जीन थेरेपी में उपयोग के लिए आसानी से उपलब्ध और उपयुक्त हैं।