जैव रसायन एवं विश्लेषणात्मक जैव रसायन

अमूर्त

उत्परिवर्ती प्रोटीनों का उपयोग करके पल्स प्रोटियोलिसिस द्वारा हाइपरथर्मोफिलिक Tk-RNase H2 के धीमे प्रकटन पथ की जांच की गई

कनाको शिमा, ऐ नागाओ, जून ओकाडा, सातोशी सानो और काज़ुफुमी ताकानो

हाइपरथर्मोफिलिक आर्कियन थर्मोकॉकस कोडकारेंसिस (Tk-RNase H2) से राइबोन्यूक्लिअस H2 का अनफोल्डिंग उल्लेखनीय रूप से धीमा है। पिछले काम में, Tk-RNase H2 अनफोल्डिंग इंटरमीडिएट्स, IA-, IB-, IC- और ID-स्टेट्स को 25°C पर पल्स प्रोटियोलिसिस विश्लेषण द्वारा देखा गया था, जहाँ IB- और IC-स्टेट्स इस प्रोटीन की धीमी अनफोल्डिंग प्रक्रिया में मुख्य रूप हैं। यहाँ, हमने म्यूटेंट का उपयोग करके पल्स प्रोटियोलिसिस द्वारा Tk-RNase H2 के धीमे अनफोल्डिंग मार्ग की जाँच की। स्थिरीकृत वैरिएंट, D7N के लिए, IA- और IB-स्टेट्स का जीवनकाल कम हो गया लेकिन IC-स्टेट 25°C पर पहले दिखाई दिया, जो IC-स्टेट के स्थिरीकरण को दर्शाता है। अस्थिर वैरिएंट L33A में 25°C पर IA- और IB-स्थितियाँ नहीं देखी गईं, जबकि जंगली-प्रकार में ये दोनों अवस्थाएँ 50°C पर गायब हो गईं। हमारे परिणाम बताते हैं कि उच्च तापमान पर IC-स्थिति Tk-RNase H2 की वास्तविक मूल अवस्था है, जबकि 25°C पर मूल, IA- और IB-स्थितियाँ कम तापमान पर कृत्रिम रूप हैं।