जीन प्रौद्योगिकी

अमूर्त

5ʹ अनूदित और अनूदित क्षेत्र को बदलकर ई. कोली में पुनः संयोजक मानव प्रोइंसुलिन अभिव्यक्ति

असलम एफ, लतीफ के, वसीम आर, नाज़ एस और इफ्तिखार एस

मैसेंजर आरएनए डीएनए के कोड को आरएनए स्थानांतरित करने के लिए स्थानांतरित करके, अनुवाद की प्रक्रिया आरंभ करता है। शाइन-डालगार्नो अनुक्रम नामक एक पॉली प्यूरीन समृद्ध अनुक्रम प्रारंभ कोडन की स्थिति निर्धारित करने में मदद करता है, शाइन-डालगार्नो अनुक्रम भिन्न है क्योंकि यह इस अनुक्रम से सीधे बंधन के माध्यम से mRNA पर आंतरिक स्थिति में राइबोसोम का निर्माण करने की अनुमति देता है। अनुवाद आरंभ स्थल के 5'छोर पर राइबोसोमल बंधन स्थल mRNA द्वितीयक संरचना को बांधने के लिए उपयोग किया जाता है, आरबीएस और प्रारंभ कोडन के बीच की दूरी एक जीन की अनुवाद संबंधी क्षमता को प्रभावित करती है। इस अध्ययन में हम अनुवाद संबंधी अभिव्यक्ति के विभिन्न अनुपात प्राप्त करने के लिए राइबोसोम बंधन स्थल और प्रारंभ कोडन के बीच की दूरी को बदलते हैं। जब बीच में 10 न्यूक्लियोटाइड होते हैं, तो अभिव्यक्ति 2-4% तक कम हो जाती है। आरबीएस और स्टार्ट कोडन के बीच 12 न्यूक्लियोटाइड होने पर, अभिव्यक्ति 1-2% तक और कम हो जाती है। चूंकि ये प्रयास यादृच्छिक होते हैं, इसलिए एम-फोल्ड द्वारा mRNA की द्वितीयक संरचनाओं की जाँच करने से राइबोसोम बाइंडिंग साइट और प्रोइंसुलिन जीन की शुरुआत के बीच एक बंधन दिखाई दिया। mRNA की द्वितीयक संरचना को कम स्थिर बनाने के लिए प्रोइंसुलिन जीन की शुरुआत में दस अलग-अलग न्यूक्लियोटाइड को शामिल करके एक और प्रयास किया गया (ΔG=-5.5) BL21 कोडन प्लस कोशिकाओं में प्रोइंसुलिन की अभिव्यक्ति में महत्वपूर्ण रूप से बदलाव नहीं करता है। प्रोटीन अभिव्यक्ति के अन्य नियंत्रित कारक हैं, जैसे कि चयापचय अस्थिरता, mRNA का तेजी से क्षरण या प्रोटीन का संचय mRNA की अभिव्यक्ति को कम कर सकता है।