जैव रसायन एवं विश्लेषणात्मक जैव रसायन

अमूर्त

एक सस्ते फ्लोरोसेंट ऑप्टिकल ब्राइटनर का उपयोग करके एक-आयामी पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन पर प्रोटीन का तेजी से पता लगाना

शशिधर आरबी, तनुजा कोसुरी और सुजाता नायक

एक वाणिज्यिक फैब्रिक फ्लोरोसेंट ऑप्टिकल ब्राइटनर रानीपाल ^® (एफ-ओबी), को नेटिव और एसडीएस -1डी-पीएजीई पर प्रोटीन को दागने के लिए सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया गया है। एफ-ओबी को डाइक्लोरोमेथेन और पानी की एक द्विध्रुवीय विलायक प्रणाली का उपयोग करके शुद्ध किया गया था। शुद्ध और कच्चे एफ-ओबी के आर _एफ मूल्य (0.63) टीएलसी पर तुलनीय थे। शुद्ध एफ-ओबी की द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री ने 414 (एम/जेड) पर बेस पीक का संकेत दिया। एफ-ओबी का अवशोषण और उत्सर्जन अधिकतम क्रमशः 350 एनएम और 430 एनएम पाया गया। एफ-ओबी नेटिव जेल पर प्री- और पोस्ट-इलेक्ट्रोफोरेटिक रन दोनों में प्रोटीन को दाग सकता है। पोस्टइलेक्ट्रोफोरेटिक धुंधलापन तेजी से हुआ और दागदार प्रोटीन को देखने के लिए 20 मिनट की आवश्यकता थी। दूसरी ओर, एसडीएस जैल में, एफ-ओबी के साथ प्रोटीन को दागने से पहले एसडीएस के निष्कर्षण के लिए अतिरिक्त 20 मिनट की आवश्यकता थी। एसडीएस को प्रोटीन से एफ-ओबी के बंधन में बाधा डालते हुए पाया गया। आणविक भार मार्करों की अलग-अलग सांद्रता लोड की गई और उनकी फ्लोरोसेंट तीव्रता को प्रोटीन की सांद्रता के विरुद्ध प्लॉट किया गया। आर ² मान 0.965 से 0.997 तक थे जो उत्कृष्ट रैखिकता को दर्शाता है। कार्बोनिक एनहाइड्रेज़ का पता लगाना 8.0-800 एनजी की सीमा में था। प्रोटीन धुंधला करने के लिए इस्तेमाल किए जाने वाले अधिकांश रंगों के विपरीत, एफ-ओबी के साथ धुंधला करना टैंक बफर (2 मिलीग्राम / 100 एमएल) में किया जा सकता है और यह प्रतिवर्ती भी है। एफ-ओबी, शायद प्रोटीन को धुंधला करने के लिए सबसे अधिक लागत प्रभावी फ्लोरोसेंट डाई होगी (यूएस $ 0.04 / 25.0 ग्राम)। एफ-ओबी को पॉलीएक्रिलामाइड जैल पर प्रोटीन को धुंधला करने के लिए एक विकल्प के रूप में सरल, सुरक्षित, संवेदनशील, कम समय लेने वाला और किफायती फ्लोरोसेंट डाई पाया गया।