जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

एक सरल हिलाने की विधि का उपयोग करके विभेदित तंत्रिका स्टेम सेल संतान से अपरिपक्व न्यूरॉन्स को शुद्ध करना

हसन अज़ारी, शरारेह शरीफ़िफ़र, रोया पी दारियोश, मरियम रहमान, जेफ़ एम फोर्टिन और ब्रेंट ए रेनॉल्ड्स

उद्देश्य: समृद्ध न्यूरोनल कोशिका आबादी प्रयोगशाला जांच और सेल थेरेपी अनुप्रयोगों दोनों के लिए मूल्यवान उपकरण हैं। हालाँकि, उपलब्ध सेल शुद्धिकरण दृष्टिकोण FACS या MACS जैसे महंगे उपकरणों की मांग करते हैं जो उनकी सार्वभौमिक पहुँच को सीमित करते हैं। इस अध्ययन में, हमने किसी भी महंगे सेल पृथक्करण उपकरण का उपयोग किए बिना उनके विभेदक सब्सट्रेट लगाव गुणों के आधार पर अपरिपक्व न्यूरोनल कोशिकाओं को विभेदित तंत्रिका स्टेम सेल (dNSC) संतानों से शुद्ध करने के लिए एक कुशल विधि विकसित की। विधियाँ: न्यूरोस्फीयर परख का उपयोग करके भ्रूण के दिन 14 चूहों के मस्तिष्क के गैंग्लियोनिक एमिनेंस से तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं को काटा गया। फिर न्यूरोस्फीयर को एकल कोशिकाओं में अलग किया गया और न्यूरोब्लास्ट परख विधि का उपयोग करके विभेदित किया गया। एक संक्षिप्त ट्रिप्सिनाइजेशन के बाद, अंतर्निहित एस्ट्रोसाइटिक सेल मोनोलेयर से शीर्ष न्यूरोनल सेल समूहों को अलग करने के लिए dNSC संस्कृति को 30 मिनट के लिए 150 आरपीएम पर धीरे से हिलाया गया। न्यूरोनल शुद्धिकरण उपज, एस्ट्रोसाइट संदूषण, और विभाजित कोशिकाओं की उपस्थिति की तुलना पीएसएएनकैम एंटीबॉडी का उपयोग करके एमएसीएस शुद्धिकरण विधि से की गई। परिणाम: जबकि एमएसीएस का उपयोग करके 97.1 ± 0.45% की न्यूरोनल उपज प्राप्त की गई थी; यह शेकिंग विधि का उपयोग करके 97.9 ± 0.6% तक पहुंच गई जो कि काफी अलग नहीं थी। दूसरी ओर, एमएसीएस दृष्टिकोण में एस्ट्रोसाइट्स का प्रतिशत 1.18 ± 0.15% था, लेकिन शेकिंग विधि का उपयोग करके यह काफी कम होकर 0.6 ± 0.15% हो गया। इसके अलावा, एमएसीएस और शेकिंग विधियों में अलग की गई कोशिकाओं का क्रमशः 4.41 ± 0.23% और 5.3 ± 0.4%, Ki-67 इम्यूनोरिएक्टिव विभाजित कोशिकाएं थीं, जिनमें से 97.34 ± 1.6% और 97.9 ± 0.7% β III-ट्यूबुलिन को सह-अभिव्यक्त कर रहे थे, जो उनकी न्यूरोनल पहचान की पुष्टि करता है। इसके अतिरिक्त, न्यूरल-कॉलोनी बनाने वाली कोशिका परख के आधार पर, शेकिंग विधि के परिणामस्वरूप किसी भी वास्तविक NSC संदूषण के बिना एक समरूप न्यूरोनल कोशिका आबादी उत्पन्न हुई। निष्कर्ष: शेकिंग शुद्धिकरण विधि डीएनएससी संतान से अपरिपक्व न्यूरॉन्स को आसान, कम लागत, कुशल और बड़े पैमाने पर अलग करने की अनुमति देती है, जो संभावित रूप से बुनियादी और नैदानिक ​​दोनों अनुप्रयोगों को लाभान्वित करती है।