जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

चिकित्सीय उपयोग के लिए अच्छे विनिर्माण अभ्यास ग्रेड इक्विन एडीपोज्ड व्युत्पन्न मेसेनकाइमल स्टेम कोशिकाओं का उत्पादन

शशांक गौड़ा, आर्या हरि, बसवराज चौगुले, मनोज कुमार रेड्डी, अभिषेक चंदनन, मिनिता सोढ़ी, निकोल कोशी, लायल फोंसेका और सतीश टोटे

मेसेनकाइमल स्टेम सेल (MSC) का वर्तमान में घोड़ों पर किए जाने वाले नैदानिक ​​अध्ययनों में विभिन्न विकारों और चोटों के उपचार की उनकी क्षमता के लिए मूल्यांकन किया जा रहा है। अध्ययनों से पता चला है कि ऑटोलॉगस और एलोजेनिक दोनों स्टेम सेल सुरक्षित प्रतीत होते हैं। हालाँकि, एक कुशल सेल विस्तार विधि जो विश्वसनीय और लागत प्रभावी है, ऑफ-द-शेल्फ क्लिनिकल ग्रेड स्टेम सेल प्रदान करने के लिए आवश्यक है। हमारे अध्ययन का उद्देश्य कुशल बड़े पैमाने पर स्टेम सेल विस्तार के लिए इष्टतम संस्कृति स्थितियों का निर्धारण करना था। हमने बड़े पैमाने पर cGMP मानक घोड़े के वसा से प्राप्त मेसेनकाइमल स्टेम सेल का उत्पादन किया। पांच अलग-अलग माध्यम संयोजनों - डुलबेको के संशोधित ईगल के माध्यम-नॉकआउट (डीएमईएम-केओ), अल्फा संशोधित न्यूनतम आवश्यक माध्यम (α-एमईएम), 50:50 डीएमईएम-केओ/α-एमईएम, 75:25 डीएमईएम-केओ/α-एमईएम और 25:75 डीएमईएम-केओ/α-एमईएम - का उपयोग 1000, 2000, 3000, 4000 और 5000 कोशिकाओं/सेमी2 की बीजाई घनत्व पर बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए इष्टतम संस्कृति स्थितियों को निर्धारित करने के लिए किया गया था। विकास गतिकी, इम्यूनोफेनोटाइप, कैरियोटाइप, आकृति विज्ञान, त्रिवंशीय विभेदन, टी-कोशिका प्रसार, वायरस सकारात्मकता, पूर्व-नैदानिक ​​विषाक्तता और प्लुरिपोटेंसी मार्करों की अभिव्यक्ति का विश्लेषण किया गया। परीक्षण किए गए माध्यम संयोजनों और बीजारोपण घनत्वों में, 5000 कोशिकाओं/सेमी2 के बीजारोपण घनत्व पर 25:75 DMEM-KO/α-MEM बड़े पैमाने पर विस्तार के लिए इष्टतम पाया गया। इस माध्यम संयोजन ने अन्य माध्यम संयोजनों की तुलना में काफी अधिक कोशिका उपज दी, जबकि उनकी स्टेम सेल विशेषताओं और विभेदन क्षमता को संरक्षित किया। परिणामों ने संकेत दिया कि एक उपयुक्त संस्कृति प्रणाली को अपनाने से कोशिका उपज में काफी सुधार हुआ, जिससे लागत प्रभावी तरीके से चिकित्सीय अनुप्रयोग के लिए पर्याप्त कोशिकाओं का उत्पादन संभव हो सका। परिणामों ने यह भी दिखाया कि बड़े पैमाने पर विस्तार की विधि में कोशिकाओं के न्यूनतम हेरफेर की आवश्यकता होती है, और इसे वास्तविक स्टेम कोशिकाओं की विशेषताओं को बनाए रखते हुए दो मार्गों के भीतर एक्स विवो विस्तारित किया जा सकता है।