जीन प्रौद्योगिकी

अमूर्त

अज़ूरिन का आणविक पता लगाना और अभिव्यक्ति: स्यूडोमोनास प्रजाति के स्थानीय पृथक्करणों से प्राप्त एक कैंसर-रोधी प्रोटीन

असलम एफ, फारूक ए, कैसर एच, बाजवा एस, सलीम एफ और नाज़ एस

2000 में एजुरिन को कैंसर रोधी दवा के रूप में मान्यता दी गई थी, यह एपोप्टोसिस और साइटोटॉक्सिसिटी को प्रेरित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। ट्यूमर कोशिकाओं में प्रवेश करने के बाद एजुरिन साइटोसोल और परमाणु सामग्री के साथ जुड़ सकता है और p53 (एक ट्यूमर सप्रेसर प्रोटीन) को स्थिर कर सकता है जो कोशिका के अंदर इसके स्तर को बढ़ाने में मदद करता है। स्यूडोमोनस एरुगिनोसा से एजुरिन के 447 बीपी पीसीआर प्रवर्धित टुकड़े को pTG19-T क्लोनिंग वेक्टर में क्लोन किया गया था। डीएनए अनुक्रम 19 अमीनो एसिड के सिग्नल पेप्टाइड के साथ एक प्री-प्रोटीन की भविष्यवाणी करता है जिसके बाद 128-एमिनोएसिड परिपक्व एजुरिन प्रोटीन होता है। एजुरिन जीन को pET22b वेक्टर में क्लोन किया गया था। पुनः संयोजक rpET22b (+)-Azu वेक्टर को BL21-कोडन प्लस (DE3) कोशिकाओं में क्लोन किया गया था। 37 डिग्री सेल्सियस पर 6 घंटे के बाद IPTG की 0.5 mM सांद्रता पर एजुरिन जीन की अनुकूलित, उच्च अभिव्यक्ति प्राप्त की गई। अनुक्रमण एजुरिन के रिपोर्ट किए गए अनुक्रम के साथ 99.8% अनुक्रम समरूपता दिखाता है। 17वें अमीनो एसिड में एक मूक उत्परिवर्तन यानी CCA से CCG का पता चला है। हालाँकि, परिणामी अमीनो एसिड (प्रोलाइन) वही रहता है।