जीवविज्ञान और चिकित्सा

अमूर्त

लिपोपॉलीसेकेराइड (LPS) और प्रोटीन-LPS कॉम्प्लेक्स: जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस, मास स्पेक्ट्रोमेट्री और बायोएसे द्वारा पता लगाना और लक्षण वर्णन

यूजेनियो हार्डी, कैरिडैड रोड्रिग्ज और लुइस ई. ट्रुजिलो

लिपोपॉलीसेकेराइड (LPS) की विशिष्ट रिसेप्टर्स के साथ अंतःक्रिया और उसके परिणामस्वरूप होने वाले पैथोफिजियोलॉजिकल प्रभावों की खोज और विशेषता के लिए एक शर्त LPS प्रजातियों का व्यापक संरचनात्मक विश्लेषण है। इस संक्षिप्त समीक्षा का उद्देश्य LPS का पता लगाने और उनकी विशेषता के लिए अन्य जैव रासायनिक तकनीकों से जुड़े जेल वैद्युतकणसंचलन के उपयोग को संक्षेप में प्रस्तुत करना है। लिपोपॉलीसेकेराइड समुच्चय अकेले या LPS और प्रोटीन/पेप्टाइड युक्त मिश्रण को नेटिव एगरोस जेल वैद्युतकणसंचलन (NAGE) द्वारा अलग किया जा सकता है, जिसके बाद इमिडाज़ोल और जिंक लवण के साथ LPS का पता लगाया जाता है। कूमासी ब्रिलियंट ब्लू R-250 के साथ एक डबल-स्टेनिंग प्रक्रिया प्रोटीन-LPS अंतःक्रियाओं का पता लगाने और उनका अध्ययन करने के लिए NAGE के उपयोग को सक्षम बनाती है। संरचनागत विश्लेषण के लिए, LPS समुच्चय को सर्फेक्टेंट-पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा उच्च रिज़ॉल्यूशन के साथ अलग किया जाता है। जिंक-इमिडाज़ोल के साथ रिवर्स स्टेनिंग और जेल माइक्रोपार्टिकल्स से निक्षालन के बाद, ग्लाइकोफ़ॉर्म-विशिष्ट LPS संरचनात्मक और जैविक विश्लेषण के लिए तैयार हैं। ऑलिगोसेकेराइड के टेंडम इलेक्ट्रोस्प्रे आयनीकरण मास स्पेक्ट्रोमेट्री (ईएसआई-एमएस/एमएस) पर आधारित अनुक्रम विश्लेषण के लिए, एलपीएस को हल्के एसिड हाइड्रोलिसिस, डीफॉस्फोराइलेशन और परमेथिलेशन के अधीन किया जाता है। इसके अलावा, ओ-डिएसीलेटेड एलपीएस रूपों का विश्लेषण मैट्रिक्स-सहायता प्राप्त लेजर डिसोर्प्शन/आयनीकरण-टाइम ऑफ फ्लाइट-एमएस द्वारा किया जा सकता है। अपरिष्कृत एलपीएस के स्पेक्ट्रा की तुलना में, माइक्रोप्यूरिफाइड एलपीएस के मास स्पेक्ट्रा में कम विषमता और बढ़े हुए सिग्नल-टू-शोर अनुपात दिखाई देते हैं। इसके अलावा, एमएस से पहले एलपीएस का माइक्रोप्यूरिफिकेशन कम प्रचुर मात्रा में एलपीएस ग्लाइकोफॉर्म के लिए पता लगाने की उच्च संवेदनशीलता की अनुमति देता है। माइक्रोप्यूरिफाइड एलपीएस अंशों का उपयोग स्व-संयोजन नैनोएग्रीगेट बनाने के लिए किया जा सकता है जिन्हें गतिशील प्रकाश बिखराव द्वारा पता लगाया जा सकता है। लेजर डॉपलर इलेक्ट्रोफोरेसिस पर आधारित मापों द्वारा एलपीएस एग्रीगेट की Z-क्षमता पर ओ-साइड चेन लंबाई के प्रभाव का अनुमान लगाया जा सकता है। इस प्रकार प्राप्त ग्लाइकोफॉर्म-विशिष्ट एलपीएस न केवल रासायनिक रूप से अक्षुण्ण हैं, बल्कि जैविक रूप से भी सक्रिय हैं, जैसा कि उदाहरण के लिए लिमुलस अमीबोसाइट लाइसेट परीक्षण, टीएनएफ-α परख और मानव टोल-लाइक रिसेप्टर 4 पर एगोनिस्टिक प्रभाव द्वारा परीक्षण किया गया है।