जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

म्यूरिन इंटरज़ोन कोशिकाओं का लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन: परत चयन और आरएनए उपज की भविष्यवाणी

फ्लोरियन जेनर, गेर्जो जेवीएम वैन ओश, मैरेड क्लीरी, आइरिस रिबित्श, उलरिच सॉयर, रेने वैन वीरेन और पीटर ब्रामा

उद्देश्य: आर्टिकुलर कोन्ड्रोसाइट्स भ्रूण के विकासशील जोड़ों में तथाकथित इंटरज़ोन में स्थित प्रोजेनिटर कोशिकाओं के एक अलग समूह से उत्पन्न होते हैं। हमने यह अध्ययन 1) यह निर्धारित करने के लिए किया कि क्या मध्यवर्ती और बाहरी इंटरज़ोन परतों को हिस्टोलॉजिकल रूप से (क्रेसिल वायलेट का उपयोग करके) बिना सहायक इन सीटू हाइब्रिडाइजेशन या इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के पहचानना संभव है; 2) यह स्थापित करने के लिए कि क्या जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण की अनुमति देने के लिए व्यक्तिगत भ्रूण की प्रत्येक इंटरज़ोन परत से पर्याप्त मात्रा में आरएनए काटा जा सकता है; 3) ऐसे माप विकसित करने के लिए जो महंगे प्रवर्धन चरणों से पहले आरएनए उपज का अनुमान प्रदान कर सकते हैं। तरीके: 13.5 और 15.5 दिनों की गर्भावस्था के म्यूरिन भ्रूणों के नवजात फीमरोटिबियल जोड़ के बाहरी (OI) और मध्यवर्ती (II) इंटरज़ोन और फीमर और टिबिया के एपिफिसियल कार्टिलेज (EC) से कोशिकाओं को लेजर कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन (LCM) का उपयोग करके काटा गया। इसके बाद, उचित परत चयन की पुष्टि करने के लिए माइक्रोएरे विश्लेषण किया गया। LCM के दौरान लिए गए फोटोमाइक्रोग्राफ़्स के एकत्रित सतह क्षेत्र और ग्रे मान (gv) को मापा गया और संबंधित सापेक्ष ऑप्टिकल घनत्व (ROD) की गणना की गई और RNA उपज के साथ सहसंबंध की डिग्री और महत्व निर्धारित किया गया। परिणाम: OI, II और EC से कोशिकाओं को क्रेसिल वॉयलेट अभिरंजन का उपयोग करके हिस्टोलॉजिकल रूप से पहचाना जा सका और LCM के साथ सफलतापूर्वक काटा गया जिससे रैखिक प्रवर्धन और माइक्रोएरे विश्लेषण के लिए पर्याप्त मात्रा में RNA प्राप्त हुआ। RNA उपज एकत्रित ऊतक सतह क्षेत्र, औसत gv और संबंधित ROD के साथ महत्वपूर्ण रूप से सहसंबंधित थी। निष्कर्ष: यह अध्ययन मध्यवर्ती और बाहरी परत की म्यूरिन इंटरज़ोन कोशिकाओं के चयनात्मक लेज़र कैप्चर माइक्रोडिसेक्शन और उसके बाद के माइक्रोएरे विश्लेषण के लिए एक तकनीक प्रदान करता है हम 13.5 दिनों के चूहे के भ्रूणों से न्यूनतम 1×106 μm2 और 15.5 दिनों के चूहे के भ्रूणों से न्यूनतम 3×106 μm2 एकत्र करने की अनुशंसा करते हैं, जिससे लगभग 10 एनजी कुल आरएनए प्राप्त हो सके, जिसका उपयोग रैखिक टी7-आधारित प्रवर्धन और तत्पश्चात माइक्रोएरे विश्लेषण के लिए किया जा सकता है।