जैव रसायन एवं विश्लेषणात्मक जैव रसायन

अमूर्त

लिवर स्कैवेंजर रिसेप्टर्स द्वारा हेपारिन क्लीयरेंस

एडवर्ड एन. हैरिस

जीपीसीआर पर काम करने वाले हिट या लीड यौगिकों की पहचान के लिए एचटीएस प्रयोगशालाओं में बाइंडिंग और सिग्नलिंग के लिए परख प्रौद्योगिकियों की श्रृंखला विकसित की गई है। [35S] GTPγS बाइंडिंग परख अभी भी रिसेप्टर सक्रियण को प्रदर्शित करने के लिए एक उपयोगी और सरल तकनीक बनी हुई है और यह कुछ कार्यात्मक, सेल-फ्री परखों में से एक है। हालाँकि, इसकी रेडियोधर्मी प्रकृति नियमित प्रयोगशाला अभ्यास और उच्च-थ्रूपुट प्रयोगों में इसके उपयोग पर स्पष्ट सीमाएँ लगाती है। यहाँ, हमने यूरोपियम-लेबल वाले GTP एनालॉग का उपयोग करके परख का एक नया गैर-रेडियोधर्मी संस्करण विकसित किया है जिसमें यूरोपियम-GTP बाइंडिंग को समय-समाधान प्रतिदीप्ति का उपयोग करके परख किया जा सकता है। हमारे प्रयासों के क्रम में, इस परख को हिस्टामाइन 3 रिसेप्टर्स के लिए अनुकूलित किया गया था। परख प्रारूप का मूल्यांकन विशेष रूप से ज्ञात हिस्टामाइन 3 एगोनिस्ट (इमेटिट, इम्मेपिप, मिथाइलहिस्टामाइन, प्रोक्सीफैन और हिस्टामाइन) और प्रतिपक्षी (जीएसके189254, क्लोबेनप्रोपिट और थियोपेरामाइड) दवाओं के परीक्षण द्वारा किया गया था। अनुकूलित परख स्थितियों के तहत, बंधन परख में क्षमताएं (pEC50 और PKB) आइसोटोपिक कार्यात्मक गतिविधि परख में पहले प्राप्त की गई क्षमताओं के साथ अच्छी तरह से मेल खाती हैं। Eu-GTP बंधन परख को बेसल काउंट पर उच्च प्रतिशत के साथ अत्यधिक मजबूत (Z' फैक्टर 0.84) पाया गया। इस परख का उपयोग हिस्टामाइन 3 रिसेप्टर प्रतिपक्षी की स्क्रीनिंग के लिए स्क्रीनिंग कैस्केड के एक घटक के रूप में किया जा सकता है।