एकल कोशिका जीव विज्ञान

अमूर्त

साइड पॉपुलेशन फेनोटाइप के आधार पर CWR-R1 प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन और मानव प्रोस्टेट ऊतक से पृथक एकल कोशिकाओं में जीन अभिव्यक्ति

कल्याण जे गंगावरपु, ऑस्टिन मिलर और वेंडी जे हस

एकल कोशिका स्तर पर जैविक संकेतों को परिभाषित करने से कैंसर की शुरुआत करने वाले चालक उत्परिवर्तन की पहचान की जा सकती है। माइक्रोफ्लुइडिक्स सॉर्टिंग और चुंबकीय कैप्चरिंग सिस्टम जैसी एकल कोशिकाओं को अलग करने की तकनीकों में ऐसी सीमाएँ हैं जैसे: उच्च लागत, श्रम गहन, और बड़ी संख्या में कोशिकाओं की आवश्यकता। इसलिए, हमारे वर्तमान अध्ययन का लक्ष्य एक लागत और श्रम प्रभावी, विश्वसनीय और पुनरुत्पादनीय तकनीक की पहचान करना है जो मानक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पीसीआर (आरटी-पीसीआर) सहित नियमित प्रयोगशाला उपयोग को बढ़ावा देने के लिए विश्लेषण के लिए एकल कोशिका अलगाव की अनुमति देता है।

वर्तमान अध्ययन में, हमने एटीपी बाइंडिंग कैसेट (एबीसी) ट्रांसपोर्टर इफ्लक्स ऑफ डाई साइकिल वायलेट (डीसीवी), साइड पॉपुलेशन परख के आधार पर सीडब्ल्यूआर-आर1 प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन और मानव प्रोस्टेट क्लिनिकल नमूनों से अलग किए गए एकल प्रोस्टेट कोशिकाओं का उपयोग किया। चार जीनों की अभिव्यक्ति: एबीसीजी2; एल्डिहाइड डिहाइड्रोजनेज1ए1 (एएलडीएच1ए1); एंड्रोजन रिसेप्टर (एआर); और भ्रूण स्टेम सेल मार्कर, ऑक्ट-4, निर्धारित किए गए।

CWR-R1 सेल लाइन में वर्तमान अध्ययन के परिणामों ने ABCG2 और ALDH1A1 जीन अभिव्यक्ति को क्रमशः 67% सिंगल साइड पॉपुलेशन कोशिकाओं और 17% या 100% नॉन-साइड पॉपुलेशन कोशिकाओं में दिखाया। नैदानिक ​​नमूनों से अलग किए गए सिंगल कोशिकाओं का उपयोग करके किए गए अध्ययनों से पता चला कि Oct-4 जीन केवल 22% सिंगल साइड पॉपुलेशन कोशिकाओं और 78% सिंगल नॉन-साइड पॉपुलेशन कोशिकाओं में पाया जाता है। जबकि, AR जीन अभिव्यक्ति 100% सिंगल साइड पॉपुलेशन और नॉन-साइड पॉपुलेशन कोशिकाओं में एक ही मानव प्रोस्टेट नैदानिक ​​नमूने से अलग की गई है।

ये अध्ययन दर्शाते हैं कि FACS द्वारा पृथक की गई एकल कोशिकाओं पर RT-PCR का प्रयोग करके कोशिका रेखाओं और एंजाइम द्वारा पचाए गए ऊतकों से एकल कोशिकाओं में जीन अभिव्यक्ति का निर्धारण सफलतापूर्वक किया जा सकता है। जबकि ये अध्ययन सरल हाँ/नहीं अभिव्यक्ति रीडआउट प्रदान करते हैं, अधिक संवेदनशील मात्रात्मक RT-PCR यदि आवश्यक हो तो और भी अधिक जानकारी प्रदान करने में सक्षम होगा।