जर्नल ऑफ माइक्रोबियल एंड बायोकेमिकल टेक्नोलॉजी

अमूर्त

मिथाइलोट्रोफिक यीस्ट पिचिया पास्टोरिस में कोडोन-अनुकूलित कैरिका पपाया पापेन अनुक्रम की अभिव्यक्ति

निकोल वर्नर, थॉमस हिर्थ, स्टीफ़न रूप और सुज़ैन ज़िबेक

सिस्टीन एंडोप्रोटीज पपैन औद्योगिक अनुप्रयोगों के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले प्लांट प्रोटीज में से एक है। हालाँकि पपीते के पौधों के लेटेक्स से पपैन का पारंपरिक पृथक्करण विश्वव्यापी मांग को पूरा नहीं कर सकता है। औद्योगिक अनुप्रयोगों के लिए पपैन उत्पादन बढ़ाने के लिए, इसके पुनः संयोजक उत्पादन के लिए पिछले वर्षों में कई अभिव्यक्ति प्रणालियों का अध्ययन किया गया था। जबकि एस्चेरिचा कोली में अभिव्यक्ति के परिणामस्वरूप अघुलनशील प्रोटीन का संचय हुआ, बैकुलोवायरस/कीट प्रणाली और सैक्रोमाइस सेरेविसिया में अभिव्यक्ति के परिणामस्वरूप बड़े पैमाने पर उत्पादन के लिए अपर्याप्त घुलनशील प्रोटीन की कम पैदावार हुई। यहाँ हम पिचिया पास्टोरिस स्ट्रेन X33 (Mut+) और KM71H (Muts) में एक सिंथेटिक कोडन-अनुकूलित प्रोपैपेन अनुक्रम की विषम अभिव्यक्ति का वर्णन करते हैं। पुनः संयोजक प्रोपैपेन को घुलनशील प्रोटीन के रूप में व्यक्त किया जा सकता है और α-फैक्टर सिग्नल पेप्टाइड के माध्यम से संस्कृति माध्यम में स्रावित किया जा सकता है। जटिल माध्यम में खेती किए जाने पर म्यूट्स स्ट्रेन में उच्चतम गतिविधियाँ प्राप्त हुईं। Ni-NTA क्रोमैटोग्राफी द्वारा शुद्धिकरण के बाद 463 मिलीग्राम/लीटर पुनः संयोजक प्रोपेपैन प्राप्त किया गया, जो प्रोटीन घुलनशीलता और पुनर्संयोजन के बाद ई. कोली में अब तक रिपोर्ट की गई सर्वाधिक प्रोपेपैन उपज के बराबर था, तथा इसकी विशिष्ट गतिविधि पपीता लेटेक्स से प्राप्त वाणिज्यिक पपेन के समान थी।