जर्नल ऑफ माइक्रोबियल एंड बायोकेमिकल टेक्नोलॉजी

अमूर्त

एस्चेरिचिया कोली में SAK-फ्यूज्ड मानव इंटरफेरॉन अल्फा की अभिव्यक्ति और शुद्धिकरण

शार्दुल सालुंखे, भास्करज्योति प्रसाद, केतकी सबनीस-प्रसाद, अंजलि आप्टे-देशपांडे और श्रीराम पद्मनाभन

स्टैफिलोकिनेस (SAK) फ्यूजन प्रोटीन के रूप में समावेशन निकायों से ई. कोली व्युत्पन्न मानव इंटरफेरॉन -? (rhIFN ?2b) के बेहतर रीफोल्डिंग और शुद्धिकरण के लिए एक विधि का वर्णन किया गया है। इस तरह के फ्यूजन प्रोटीन को अभिव्यक्ति के लिए दुर्लभ कोडन के पूरक की आवश्यकता नहीं थी और यह 37 डिग्री सेल्सियस पर स्थिर पाया गया। रीफोल्डिंग की इष्टतम स्थितियों में एकत्रीकरण को रोकने के लिए किसी अन्य एजेंट की आवश्यकता के बिना एक हल्के डीनेचुरेटिंग एजेंट का उपयोग शामिल था। SAKrhIFN ?2b फ्यूजन प्रोटीन को शुद्धिकरण के दो चरणों का उपयोग करके सफलतापूर्वक शुद्ध किया गया और एंटरोकिनेस का उपयोग करके दो टुकड़ों में विभाजित किया गया, जिनका नाम SAK और IFN है। दोनों प्रोटीन जैविक रूप से सक्रिय पाए गए, जो दोनों फ्यूजन भागीदारों की उचित फोल्डिंग दिखाते हैं। विभाजित IFN ने RP-HPLC पर बैक्टीरिया से प्राप्त अनटैग्ड शुद्ध IFN के समान ही अवधारण समय दिखाया और साथ ही Agilent 2100 बायोएनालाइजर पर समान आणविक भार दिखाया, जो एंटरोकिनेस विभाजन के बाद IFN के सही प्रसंस्करण को दर्शाता है। SAK-IFN के अभिव्यक्ति स्तर समान प्रयोगात्मक स्थितियों के तहत अनटैग्ड IFN के साथ देखे गए स्तर से दो गुना अधिक पाए गए।