जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

डबलकोटिन-लाइक किनेज़ 1 एंटी-एपोप्टोसिस मार्ग के माध्यम से कोलोरेक्टल कैंसर कोशिकाओं की कीमोरेसिस्टेंस को बढ़ाता है

लियाना ली, किएरा जोन्स और हाओ मेई

पृष्ठभूमि: कोलोरेक्टल कैंसर (CRC) संयुक्त राज्य अमेरिका में निदान किया जाने वाला तीसरा सबसे आम कैंसर है और कैंसर से संबंधित मौतों का दूसरा प्रमुख कारण है। माना जाता है कि कैंसर स्टेम सेल (CSC) CRC की पुनरावृत्ति का प्राथमिक कारण हैं। विशिष्ट स्टेम सेल मार्कर, डबलकोर्टिन-लाइक किनेज 1 (DCLK1) ट्यूमरजनन और CRC की प्रगति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। DCLK1 का अप-रेगुलेशन खराब रोगनिदान से संबंधित है। क्या DCLK1 CRC कोशिकाओं के बढ़े हुए रसायन प्रतिरोध से संबंधित है, यह स्पष्ट नहीं है। हमारा उद्देश्य CRC कोशिकाओं के रसायन प्रतिरोध और अंतर्निहित आणविक तंत्र के साथ DCLK1 के संबंध को उजागर करना है।

विधियाँ: HCT116 कोशिकाओं (WT) का उपयोग करके स्थिर DCLK1 ओवर-एक्सप्रेशन कोशिकाएँ (DCLK1+) स्थापित की गईं। DCLK1+ और WT कोशिकाओं को 24 या 48 घंटों के लिए अलग-अलग खुराकों पर 5-फ्लूरोरासिल (5-Fu) के साथ उपचारित किया गया। सेल व्यवहार्यता का मूल्यांकन करने के लिए MTT परख का उपयोग किया गया और 5-Fu का IC50 निर्धारित किया गया। कैस्पेज़-3 (कैस्प-3), कैस्प-4 और कैस्प-10 की जीन अभिव्यक्ति निर्धारित करने के लिए मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर लागू किया गया था। वेस्टर्न ब्लॉट और इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग करके क्लीव्ड कैस्प-3 अभिव्यक्ति की जाँच की गई।

परिणाम: हमारे परिणामों ने दर्शाया कि DCLK1+ कोशिकाओं के लिए 5-Fu का IC50 24 और 48 घंटे के उपचार (क्रमशः p=0.002 और 0.048) दोनों के लिए WT कोशिकाओं की तुलना में काफी अधिक था, जो DCLK1+ कोशिकाओं की बढ़ी हुई कीमोरेसिस्टेंस को दर्शाता है। 5-Fu उपचार के बाद DCLK1+ कोशिकाओं में WT कोशिकाओं की तुलना में casp-3, casp-4 और casp-10 की जीन अभिव्यक्ति काफी हद तक बाधित हुई (क्रमशः p=7.616e-08, 1.575e-05 और 5.307e-08)। 5-Fu उपचार के बाद DCLK1+ कोशिकाओं में WT कोशिकाओं की तुलना में क्लीव्ड casp-3 की मात्रा और casp-3 पॉजिटिव कोशिकाओं में काफी कमी आई (p=0.015)।

निष्कर्ष: निष्कर्ष में, हमारे परिणामों ने प्रदर्शित किया कि DCLK1 की अधिक अभिव्यक्ति ने एपोप्टोसिस मार्ग में प्रमुख कैस्पेस की जीन अभिव्यक्ति को दबाकर और एपोप्टोसिस मार्ग को सक्रिय करके 5-Fu उपचार के लिए CRC कोशिकाओं की कीमोरेसिस्टेंस को बढ़ाया। DCLK1 CRC रोगियों के प्रभावी उपचार के लिए एक आकर्षक चिकित्सीय लक्ष्य हो सकता है।