फार्मास्युटिका एनालिटिका एक्टा

अमूर्त

पुनः संयोजक प्रोटीन का उपयोग करके Cyp3a4 चयापचय-निर्भर अवरोध के समानांतर प्रतिवर्ती साइटोक्रोम P450 अवरोध की जांच के लिए एक तीव्र और लागत प्रभावी परख का विकास

सेरेनेला ज़ाम्बोन, स्टेफ़ानो फोंटाना, राफेल लोंघी और महमूद काजबफ़

वर्तमान अध्ययन में हमने एक उच्च गुणवत्ता, तीव्र और लागत प्रभावी CYP450 अवरोध परख विकसित की है, जिसमें पुनः संयोजक रूप से व्यक्त P450 आइसोफॉर्म और फ्लोरोजेनिक P450 सब्सट्रेट का उपयोग करके प्रतिवर्ती और CYP3A4 चयापचय-निर्भर अवरोध (MDI) दोनों का पता लगाने की क्षमता है। CYP3A4 आइसोफॉर्म को जांच सब्सट्रेट के रूप में डाइएथोक्सीफ्लोरेसिन (DEF) के साथ जांचा जाता है। फिर 10 मिनट के लिए मापी गई जांच सब्सट्रेट की चयापचय दर के आधार पर, CYP3A4 आइसोफॉर्म के खिलाफ परीक्षण यौगिकों के लिए IC50 मानों की गणना की जा सकती है। इसके अलावा, परीक्षण यौगिकों की CYP3A4 चयापचय-निर्भर अवरोधक क्षमता को डाइएथोक्सीफ्लोरेसिन की चयापचय दर के निर्धारण को 30 मिनट तक बढ़ाकर और ऊष्मायन अवधि के हर 5 मिनट में IC50 मानों की गणना करके निर्धारित किया जाता है। परीक्षण यौगिकों की CYP3A4 चयापचय-निर्भर निरोधात्मक क्षमता का अनुमान 10 और 30 मिनट के ऊष्मायन के बाद मापे गए IC50 मानों की तुलना करके निर्धारित किया जा सकता है। ऊष्मायन को प्रत्यक्ष P450 अवरोध के लिए चयनात्मक CYP अवरोधक माइकोनाज़ोल और चयापचय-निर्भर अवरोध के लिए ट्रोलेंड्रोमाइसिन का उपयोग करके सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। पूरी स्क्रीनिंग प्रक्रिया 96-वेल प्लेट प्रारूप में पूरी तरह से स्वचालित थी जिसमें हैमिल्टन लिक्विड-हैंडलिंग रोबोट तकनीक के साथ दो फ्लोरीमीटर (टेकन) और एक कस्टम प्रयोगशाला-सूचना प्रबंधन का उपयोग किया गया था। यह परख वर्तमान में लीड ऑप्टिमाइज़ेशन प्रक्रिया में यौगिकों की स्क्रीनिंग करने और उन यौगिकों की पहचान करने के लिए लागू की जाती है जो प्रतिवर्ती और/या चयापचय-आधारित CYP450 अवरोध का कारण बनते हैं और इसलिए उन अणुओं या रासायनिक श्रृंखलाओं को सबसे कम DDI क्षमता के साथ आगे बढ़ाते हैं। इस परख के माध्यम से उत्पन्न डेटा की उच्च संख्या का उपयोग एक सूचनात्मक डेटाबेस बनाने और पूर्वानुमान मॉडल को बेहतर बनाने के लिए भी किया जा सकता है।