ग्लोबल जर्नल ऑफ बायोलॉजी, एग्रीकल्चर एंड हेल्थ साइंसेज

अमूर्त

एंटी रो-गामा ग्लोब्युलिन उत्पादन के औद्योगिक प्रक्रिया नियंत्रण में आईजीजी-एंटी-डी (रो) के परिमाणीकरण के लिए फ्लो साइटोमेट्री परख का डिजाइन, अनुकूलन और सत्यापन

सर्जियो ए ओविएडो, सुज़ाना विटाली, जॉर्ज ज़ारज़ूर

नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग का एक मुख्य कारण एंटी-डी एंटीबॉडी का उत्पादन है, जो गर्भवती माताओं में निरंतर एंटीजेनिक चुनौती के जवाब में होता है, जिनके लाल रक्त कोशिकाओं में डी एंटीजन नहीं होता है। जटिलताओं को रोकने के लिए, गर्भवती महिलाओं में एंटी-डी एंटीबॉडी के स्तर की निगरानी की जाती है और एंटी-डी इम्युनोग्लोबुलिन (आईजीजी एंटी-डी) के साथ प्रोफिलैक्सिस द्वारा संवेदीकरण को रोका जाता है। आज तक, प्लाज्मा और तैयार उत्पादों (आईजीजी एंटी-डी) में एंटी-डी की निगरानी और अनुमापन एक टेक्निकॉन ऑटोएनालाइजर, रेडियो इम्यूनो परख (आरआईए) और एंजाइमो इम्यूनो परख (ईआईए) के साथ निरंतर प्रवाह विश्लेषण द्वारा किया जाता है। हमारी प्रयोगशाला में, गामा-आरएचओ यूएनसी और विस्तार प्रक्रिया के उत्पादों के एंटी-डी एंटीबॉडी की मात्रा का पता लगाने के लिए, यूरोपीय फार्माकोपिया की संदर्भ विधि के लिए वैकल्पिक परीक्षण के रूप में फ्लो साइटोमेट्री की एक "घरेलू" तकनीक विकसित की गई थी। पॉलीक्लोनल एंटी-आरएचओ एंटीबॉडी और एंटी एफआईटीसी (फ्लोरोसेन आइसोथियोसाइनेट)-लेबल वाले मानव आईजीजी का उपयोग गामाग्लोब्युलिन, अर्ध-संसाधित और मानव प्लाज्मा की व्यावसायिक तैयारी में एंटी-डी एंटीबॉडी की सांद्रता को मापने के लिए किया गया था। इस विधि को एंटी-डी आईजीजी (69/419) के लिए पहले अंतर्राष्ट्रीय डब्ल्यूएचओ मानक का उपयोग करके विकसित किया गया था। विधि में उपयोग की गई लाल कोशिकाओं की सांद्रता (5 x 104 कोशिकाएं/उल) पर ऑटो एग्लूटिनेशन द्वारा कोई हस्तक्षेप नहीं होता है। प्राप्त खुराक प्रतिक्रिया वक्र (एमएफआई बनाम लॉग सी) अपनाई गई कार्य सीमा में रैखिक था, जो 0.99 का सहसंबंध गुणांक प्रस्तुत करता है। विशिष्टता और पुनर्प्राप्ति परीक्षण संतोषजनक थे, नकारात्मक नियंत्रणों ने प्रतिदीप्ति के महत्वहीन स्तर दिखाए और निर्धारण में कोई गंभीर हस्तक्षेप नहीं किया। यह जानते हुए कि लाल रक्त कोशिका द्वारा एंटी-डी साइट्स एंटीजन के स्तर, फेनोटाइप के अनुसार भिन्न होते हैं, हमारे परिणाम दिखाते हैं कि फेनोटाइप R1R1 वाले ग्लोब्यूल इस परीक्षण के लिए सबसे अच्छा प्रदर्शन प्रस्तुत करते हैं, और यदि आवश्यक हो तो R1R2 कोशिकाओं द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है। इस विधि को NIBSC और यूरोपीय फार्माकोपिया के विशेषज्ञों के समूह N°6B के मानदंडों के बाद मान्य किया गया था, जिन्होंने एंटी-डी के आकलन में लागू होने वाली एक समान प्रक्रिया को मानकीकृत किया है। फ्लो साइटोमेट्री ने एंटी-डी (100-0.9 ug/ml) की विभिन्न सांद्रताओं और तैयार उत्पाद, पहले से भरे हुए सांद्र उत्पाद और कोहन की विधि के अंश II जैसे विभिन्न जैविक मैट्रिक्स में सटीक, सटीक, संवेदनशील और विशिष्ट निर्धारण प्राप्त करने की अनुमति दी। इस विधि के अनुप्रयोग में पाए जाने वाले लाभों में, अपेक्षाकृत कम लागत के अलावा, एक मजबूत प्रतिदीप्ति संकेत शामिल है जिसे प्रवर्धन की आवश्यकता नहीं होती है, अत्यधिक पतला नमूनों का उपयोग जो IgM-एंटी डी या पॉलिमर द्वारा एग्लूटिनेशन के जोखिम को कम करता है। यह एंटी-डी के सीरम स्तर को निर्धारित करने या इम्युनोग्लोबुलिन घोल में सांद्रता को मापने के लिए एक सरल, तेज और विश्वसनीय विधि है।