रक्त विकार और आधान जर्नल

अमूर्त

नैदानिक ​​परीक्षणों के लिए मानव एंडोथेलियल प्रोजेनिटर और एंडोथेलियल कोशिकाओं का क्रायोप्रिजर्वेशन और गणना

बोगोस्लोव्स्की टी, वांग डी, मैरिक डी, स्कैटरगुड-कीपर एल, स्पैट्ज़ एम, औह एस और हैलेनबेक जे

पृष्ठभूमि: एंडोथेलियल प्रोजेनिटर कोशिकाएं (EPC) एंडोथेलियल चोट के मार्कर हैं और हस्तक्षेप संबंधी नैदानिक ​​परीक्षणों में संवहनी मरम्मत के लिए एक सरोगेट मार्कर के रूप में काम कर सकती हैं। इस अध्ययन का उद्देश्य परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (PBMC) को अलग करने और परिधीय रक्त से EPC और परिपक्व एंडोथेलियल कोशिकाओं (EC) की गणना करने की विधि को संशोधित करना और PBMC की व्यवहार्यता और EPC और EC की संख्या पर क्रायोप्रिजर्वेशन के प्रभाव का मूल्यांकन करना था। रोगी/तरीके: स्वस्थ स्वयंसेवकों में CPT (कोशिका तैयारी ट्यूब) में एकत्रित ताजा पृथक PBMC और 1) गिब्को रिकवरीTM सेल कल्चर फ़्रीज़िंग मीडियम, 2) कस्टम फ़्रीज़िंग मीडियम के साथ क्रायोप्रिजर्व किए गए PBMC में EPC और EC का विश्लेषण किया गया। DAPI का उपयोग करके PBMC की व्यवहार्यता का परीक्षण किया गया। EPC को CD45-CD34+CD133+/-VEGFR2+/- के लिए गेट किया गया और EC को CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/- के लिए गेट किया गया। परिणाम: -80°C पर 7 दिनों के लिए क्रायोप्रिजर्वेशन ने व्यवहार्य PBMC को 94 ± 0.5% (ताजा) से घटाकर 84 ± 4% (कस्टम माध्यम) और 69 ± 8% (गिब्को माध्यम) कर दिया, जबकि -65°C पर क्रायोप्रिजर्वेशन ने व्यवहार्यता को घटाकर 60 ± 6% (p<0.001, कस्टम माध्यम) और 49 ± 5% (p<0.001, गिब्को माध्यम) कर दिया। ताजा नमूनों में प्रारंभिक EPC (CD45- CD34+CD133+VEGFR2+) 0.2 ± 0.06%, बाद में EPC (CD45-CD146+CD34+VEGFR2+) 0.6 ± 0.1% और परिपक्व EC (CD45-CD146+CD34-VEGFR2+) 0.8 ± 0.3% जीवित PBMC के रूप में गिना गया। 7 दिनों के लिए -80ºC पर गिबको और कस्टम फ्रीजिंग माध्यम के साथ क्रायोप्रिजर्वेशन ने EPC और EC की संख्या में कमी की, हालाँकि, यह कमी सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं थी। निष्कर्ष: हमारे डेटा से संकेत मिलता है कि 7 दिनों के लिए -80°C पर क्रायोप्रिजर्वेशन PBMC की व्यवहार्यता और EC और EPC के उपसमूहों की संख्या में कमी करता है, हालाँकि महत्वपूर्ण रूप से नहीं। यह विधि बहुकेन्द्रीय परीक्षणों के लिए उपयुक्त EPC और परिपक्व EC के उपसमूहों के पृथक्करण और अल्पकालिक क्रायोप्रिजर्वेशन के लिए एक अनुकूलित दृष्टिकोण प्रदान कर सकती है।