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अमूर्त

ई. कोली BL21 (DE3) में ALCAM प्रोटीन के C2 और V डोमेन की क्लोनिंग और अभिव्यक्ति

हसन दाना, अली मजरेह, घनबर महमूदी चलबतानी, वाहिद मर्मारी, हबीबुल्लाह महमूदज़ादेह, अली ग़मारी, फातेमे मोअज़्ज़ेन, मोहम्मद इब्राहिमी और नर्गेस महमंदोस्त

परिचय: ग्लाइकोप्रोटीन के रूप में ALCAM इम्युनोग्लोबुलिन परिवार का सदस्य है और कोशिका वृद्धि, अस्तित्व और गतिशीलता में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। यह प्रोटीन कोलोरेक्टल और स्तन कैंसर में ट्यूमर के आक्रमण के विकास में भी योगदान देता है और इसे आमतौर पर कैंसर स्टेम सेल मार्कर माना जाता है। सेल-सरफेस एंटीजन के रूप में ALCAM, कोलोरेक्टल और स्तन जैसे कुछ कैंसर में उच्च अभिव्यक्ति के साथ, इन कैंसर का निदान और उपचार करने की क्षमता रखता है। उद्देश्य: अन्य झिल्ली प्रोटीनों की तरह, ALCAM कोलोरेक्टल और स्तन कैंसर के उपचार के लिए एक संभावित लक्ष्य का प्रतिनिधित्व करता है, इसलिए, इस अध्ययन का उद्देश्य व्यावहारिक, नैदानिक ​​और उपचारात्मक योजनाओं में उपयोग किए जाने वाले C2 और V डोमेन को क्लोन और व्यक्त करना है। तरीके: इस अध्ययन में, C2 और V डोमेन के अनुक्रम को ऑनलाइन टूल का उपयोग करके प्रोकैरियोटिक होस्ट में अभिव्यक्ति के लिए अनुकूलित किया गया और pET-28a अभिव्यक्ति प्लास्मिड में क्लोन किया गया। ई. कोली BL21 (DE3) कोशिकाओं को हीट शॉक विधि का उपयोग करके pET-28a पुनः संयोजक प्लास्मिड द्वारा रूपांतरित किया गया और पुनः संयोजक V और C2 डोमेन की अभिव्यक्ति की जाँच SDS-PAGE तकनीक द्वारा की गई। परिणाम: C2 और V डोमेन के सिंथेटिक जीन NcoI/BamHI और XhoI प्रतिबंध साइटों के बीच स्थित थे और pBSK (+) वेक्टर में क्लोन किए गए थे। pET28a में इन जीनों की उपस्थिति कॉलोनी द्वारा निर्धारित की गई और प्रतिबंध पाचन द्वारा पुष्टि की गई। C2 और V डोमेन के जीन E. कोली BL21 DE3 में व्यक्त किए गए थे। SDSPAGE तकनीक के परिणामों ने एक जीवाणु अभिव्यक्ति प्रणाली में पुनः संयोजक 23 और 29 kDa C2 और V डोमेन की अभिव्यक्ति की पुष्टि की। निष्कर्ष: C2 और V डोमेन के जीन E. कोली में पुनः संयोजक के रूप में व्यक्त किए गए थे। इन पुनः संयोजक टुकड़ों को कोलोरेक्टल और स्तन कैंसर वाले रोगियों में स्क्रीनिंग और कैंसर-थेरेपी के लिए नैदानिक ​​और उपचारात्मक उम्मीदवारों के रूप में पेश किया जा सकता है।

अस्वीकृति: इस सारांश का अनुवाद कृत्रिम बुद्धिमत्ता उपकरणों का उपयोग करके किया गया है और इसे अभी तक समीक्षा या सत्यापित नहीं किया गया है।