जर्नल ऑफ बायोमोलेक्यूलर रिसर्च एंड थेरेप्यूटिक्स

अमूर्त

क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में एक साथ मानव FVIII/vWF शुद्धिकरण और वायरस निष्क्रियता का संयोजन

सर्गी पी हावरिलियुक, इवगेनिया एम क्रास्नोब्रीझा, ओलेना एस हावरिलियुक और जॉर्जी एल वोल्कोव

यह सर्वविदित है कि स्वतंत्रता की डिग्री की संख्या में कमी प्रोटीन के विकृतीकरण को रोकती है। पिछली जांच में, हमने दिखाया कि क्रोमैटोग्राफिक जेल बाइंडिंग प्रोटीन प्रोटीन की स्वतंत्रता की डिग्री की संख्या को कम करने वाले एजेंट के रूप में कार्य कर सकता है। इसके अलावा, नए विकसित जैल की उच्च गतिशील क्षमता ने क्रोमैटोग्राफिक प्रक्रिया के ऊंचे तापमान पर पेप्टाइड/प्रोटीन की संतोषजनक अवधारण प्रदान की। इन दोनों कारकों ने लक्ष्य अलगाव के दौरान स्तंभ में सीधे पेप्टाइड (स्ट्रेप्टोकिनेज खंड SK1-61) और कम (दूध लाइसोजाइम) और एक औसत (सांप के जहर से फाइब्रिनोजेनोलिटिक एंजाइम) आणविक भार प्रोटीन के लिए वायरस निष्क्रियता के कार्यान्वयन की अनुमति दी। इस अध्ययन का लक्ष्य उच्च आणविक भार परिसर FVIII/vWF की गतिविधि को बचाने की संभावना की जांच करना था, जो सीधे क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में वायरस निष्क्रियता के दौरान आयन एक्सचेंज और एफिनिटी जैल से बंधा होता है। दूसरा लक्ष्य यह दिखाना था कि बाध्यकारी प्रोटीन अधिशोषक संक्रमित वायरस को यांत्रिक रूप से धोने के लिए विश्वसनीय "छलनी" के रूप में कार्य कर सकता है। विभिन्न क्रोमैटोग्राफिक, फोटोमेट्रिक, आरटी-पीसीआर दृष्टिकोणों का उपयोग करके यह पता चला कि उच्च गतिशील क्षमता, जो अधिशोषक की उच्च तापमान-निर्भर क्षमता निर्धारित करती है, ने 3-5 घंटे के लंबे समय के दौरान 40-50 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर सीधे क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में विलायक/डिटर्जेंट उपचार द्वारा वायरस-निष्क्रिय करने वाले कॉम्प्लेक्स FVIII/vWF को निष्पादित करने की अनुमति दी। FVIII जैविक गतिविधि पूरी तरह से संरक्षित थी; लिफाफा और गैर-लिफाफा वायरस प्रभावी रूप से हटा दिए गए थे। वायरस उन्मूलन मॉडलिंग का स्तर वायरस की पूरी तरह से निष्क्रियता के लिए पर्याप्त था जिसने हमें दवा उद्योग में उपयोग करने के लिए इस पद्धति की सिफारिश करने की अनुमति दी।