जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

स्टेम सेल-आधारित पुनर्योजी चिकित्सा को आयट्रोजेनिक कैंसरोजेनेसिस के विरुद्ध सुरक्षित रखना: मानव ऑटोलॉगस प्लुरिपोटेंट प्रेरित स्टेम कोशिकाओं का विरोध करने वाले प्रोलिफरेटिंग और निर्देशित विभेदन में POLA1 प्रमोटर द्वारा नियंत्रित DNASE1, DNASE1L3, DNASE2,DFFB की ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति उनकी मृत्यु का कारण बनती है

मारेक मालेकी, क्रिस्टीन लावेन, डोमिनिक अल्हाम्ब्रा, चैतन्य डोडिवेनाका, सारा नागेल और राफ मालेकी

परिचय: पुनर्योजी चिकित्सा के लिए स्टेम कोशिकाओं के उपयोग की सबसे खराब संभावित जटिलता है इट्रोजेनिक कैंसरोजेनेसिस। हमारे काम का अंतिम लक्ष्य एक स्व-ट्रिगर फीडबैक तंत्र विकसित करना है जिसका उद्देश्य सभी स्टेम कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बनना है, जो निर्देशित भेदभाव का विरोध करते हैं, बढ़ते रहते हैं, और ट्यूमर में विकसित हो सकते हैं। विशिष्ट उद्देश्य: विशिष्ट उद्देश्य तीन गुना था: (1) मानव, पुनः संयोजक DNASE1, DNASE1L3, DNASE2, POLA प्रमोटर द्वारा नियंत्रित DFFB के लिए DNA संरचनाओं को आनुवंशिक रूप से इंजीनियर करना; (2) मानव अविभेदित और बढ़ते हुए प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाओं को ट्रांसजीन पहुंचाने वाले एंटी-SSEA-4 एंटीबॉडी निर्देशित वेक्टर को बायोइंजीनियर करना; (3) मानव पुनः संयोजक DNases (hrDNases) की ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति द्वारा बढ़ते और निर्देशित भेदभाव का विरोध करने वाले स्टेम कोशिकाओं की मृत्यु का कारण बनना। विधियाँ: POLA प्रमोटर द्वारा नियंत्रित मानव, पुनः संयोजक DNASE1, DNASE1L3, DNASE2, DFFB के लिए DNA निर्माण आनुवंशिक रूप से इंजीनियर किए गए थे। विशेष रूप से SSEA-4 व्यक्त करने वाले स्टेम सेल को लक्षित करने वाले वेक्टर बायोइंजीनियर किए गए थे। स्वस्थ स्वयंसेवकों की अस्थि मज्जा मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (BMMCs) को गैर-एकीकृत प्लास्मिड के साथ मानव, ऑटोलॉगस, प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल (hapiSCs) में प्रेरित किया गया था। प्रेरित स्टेम कोशिकाओं का एंडोथेलियल कोशिकाओं में निर्देशित विभेदन EGF और BMP के साथ पूरा किया गया था। एंटी-SSEA 4 एंटीबॉडी के निर्देशित डीएनए वेक्टर ने मानव पुनः संयोजक DNases के लिए ट्रांसजीन को प्रोलिफ़ेरेटिंग स्टेम सेल में पहुँचाया। परिणाम: प्लूरिपोटेंट प्रेरित स्टेम कोशिकाओं का एंडोथेलियल कोशिकाओं में विभेदन पुनः संयोजक फ्लोरोसेंट संलयन प्रोटीनों की ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति के माध्यम से तंग और एडहेरेंस जंक्शनों के गठन को उजागर करके सत्यापित किया गया: वीई कैडहेरिन, क्लाउडिन, ज़ोना ऑक्लुडेंस 1, और कैटेनिन। स्टेम कोशिकाओं के प्रसार को POLA प्रमोटर द्वारा नियंत्रित पुनः संयोजक फ्लोरोसेंट प्रोटीनों की ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति को उजागर करके निर्धारित किया गया था, जबकि hrDNases के लिए ट्रांसजीन की अभिव्यक्ति की रिपोर्ट भी की गई थी। DNases के लिए ट्रांसजीन की अभिव्यक्ति के परिणामस्वरूप क्रोमेटिन वास्तुकला का पूर्ण पतन और प्रोलिफ़ेरेटिंग कोशिकाओं के जीनोमिक डीएनए का क्षरण हुआ। प्रोलिफ़ेरेटिंग स्टेम सेल, लेकिन विभेदित करने वाले नहीं, प्रभावी रूप से मरने के लिए प्रेरित हुए। निष्कर्ष: यहाँ, हम रणनीति के लिए अवधारणा के प्रमाण को प्राप्त करने का वर्णन करते हैं, जिसके द्वारा आनुवंशिक रूप से इंजीनियर मानव पुनः संयोजक डीएनएस की प्रोलिफ़ेरेटिंग और निर्देशित भेदभाव का विरोध करने वाली स्टेम कोशिकाओं में ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति उनकी मृत्यु की ओर ले जाती है। यह नई रणनीति स्टेम सेल थेरेपी में आयट्रोजेनिक कैंसरोजेनेसिस के जोखिम को कम करती है ।