जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

फ्लो साइटोमेट्री और रियल टाइम पीसीआर द्वारा एफेरेसिस उत्पादों में मेगाकैरियोसाइटिक प्रोजेनीटर्स की मात्रा का निर्धारण

लेइनो ईवा, नीलसन कास्पर आर, बैच जॉन, स्टेफेंसन रूडी, डायबकेर करेन, बोएगस्टेड मार्टिन और जॉन्सन हंस ई

पृष्ठभूमि और उद्देश्य: ग्राफ्ट के भीतर CD34+/CD61+ मेगाकैरियोसाइटिक प्रोजेनिटर की गणना करके ऑटोलॉगस परिधीय रक्त स्टेम सेल प्रत्यारोपण (PBSCT) के गुणवत्ता मूल्यांकन में सुधार किया जा सकता है। फ्लो साइटोमेट्री (FC) द्वारा उपसमूहों की गणना कम विशिष्टता के कारण मानकीकृत करना मुश्किल रहा है जो प्लेटलेट या माइक्रोस्फीयर पालन से उत्पन्न हो सकता है। हमारा उद्देश्य हेमेटोपोइटिक स्टेम कोशिकाओं में प्लेटलेट पालन का विश्लेषण करना और CD34 और CD61 जीन प्रतिलेखों के लिए मात्रात्मक वास्तविक समय पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (RT-qPCR) परख स्थापित करना था। विश्लेषण का उपयोग गैर-हॉजकिन लिंफोमा (NHL) में PBSCT के बाद देर से प्लेटलेट रिकवरी के लिए पूर्वानुमान के रूप में CD34 और CD61 का अध्ययन करने के लिए किया गया था। सामग्री और विधियाँ: ऑटोलॉगस प्रत्यारोपण के लिए एकत्र किए गए एफेरेसिस उत्पादों पर FC विश्लेषण किया गया और छांटे गए कोशिकाओं पर कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी लागू की गई। नैदानिक ​​मूल्यांकन में उच्च खुराक चिकित्सा और पीबीएससीटी के साथ इलाज किए गए 21 लगातार एनएचएल रोगियों के ल्यूकेफेरेसिस उत्पादों का विश्लेषण शामिल था। प्रारंभिक रिकवरी को प्रत्यारोपण के 12 दिन पहले देखी गई प्लेटलेट काउंट >20x10(9)/L के रूप में परिभाषित किया गया था और देर से रिकवरी को प्रत्यारोपण के 12 दिन बाद देखी गई प्लेटलेट काउंट <20x10(9)/L के रूप में परिभाषित किया गया था। RT-qPCR विश्लेषण के लिए CD34+ कोशिकाओं को पिघले हुए ल्यूकेफेरेसिस उत्पादों से छांटा गया और RNA निकाला गया और TaqMan जांच का उपयोग करके CD34 और CD61 mRNA स्तरों के आगे के विश्लेषण के लिए cDNA में रिवर्स ट्रांसक्रिप्ट किया गया। परिणाम: FC द्वारा पहचानी गई CD34+/CD61+ कोशिकाएँ एक विशिष्ट उपसमूह बनाती दिखाई दीं, जिसमें परिपक्व प्लेटलेट्स के कोई लक्षण नहीं थे। CD34+/CD61+ कोशिकाओं ने CD61 mRNA प्रतिलेख व्यक्त किए जो पूरक CD34+/CD61- कोशिकाओं में नहीं पाए गए। मेगाकैरियोसाइटिक प्रोजेनिटर उपसमूहों के FC आधारित गणना और RT-qPCR विश्लेषण अनुमान के बीच कोई सकारात्मक सहसंबंध नहीं पाया गया। प्रारंभिक और देर से प्लेटलेट रिकवरी वाले 21 रोगियों के नमूनों की तुलना करके नैदानिक ​​प्रभाव का मूल्यांकन करने से CD61/BACT (β-actin), CD34/BACT या CD61/CD34 mRNA, CD34+ सॉर्टेड कोशिकाओं के बीच अभिव्यक्ति अनुपात के लिए कोई पूर्वानुमानित प्रभाव नहीं दिखा। निष्कर्ष और परिप्रेक्ष्य: CD34+/CD61+ कोशिकाओं के एक विशिष्ट उपसमूह को FC और RTqPCR विश्लेषण द्वारा पहचाना जा सकता है; हालाँकि इस उपसमूह की गणना PBSCT के बाद प्लेटलेट रिकवरी से सहसंबंधित नहीं थी। भविष्य के अध्ययनों में यूरोपीय रक्त और मज्जा प्रत्यारोपण समूह (EBMT) के भीतर अंतर्राष्ट्रीय सहयोग में एनग्राफ्टमेंट विफलता वाले रोगियों के एक समूह में पूर्वानुमानित मूल्य का मूल्यांकन किया जाना चाहिए।