जैव रसायन एवं विश्लेषणात्मक जैव रसायन

अमूर्त

मौखिक रोगजनक जीव पोर्फिरोमोनस जिंजिवलिस से मेथियोनीन गामा लाइज़-डेमिनेज (एमजीएलडी) का शुद्धिकरण और लक्षण वर्णन

डेविड मोरकोस1, ब्रैड जे श्मियर, अरुण मल्होत्रा ​​और वेंकटचलम केवी 

पोर्फिरोमोनस जिंजिवलिस एक मौखिक रोगजनक जीवाणु है जो मनुष्यों में हैलिटोसिस (सांसों की बदबू) और पीरियोडोंटाइटिस का कारण बनता है। हैलिटोसिस मेथियोनीन गामा लाइज़-डेमिनेज (Mgld) द्वारा मेथियोनीन के विघटन से उत्पन्न मिथाइलथिओल जैसे वाष्पशील सल्फर यौगिकों के कारण प्रकट होता है। इस रिपोर्ट में, हमने एक जीवाणु अभिव्यक्ति प्रणाली का उपयोग करके पोर्फिरोमोनस जिंजिवलिस mgld को क्लोन और व्यक्त किया, और शुद्ध होमोटेट्रामेरिक एंजाइम को सब्सट्रेट के रूप में L-[1-14C]-मेथियोनीन का उपयोग करके एक नए आइसोटोप परख द्वारा विशेषता दी गई। Mgld एक PLP-निर्भर L-मेथियोनीन CS लाइज़ेडेमिनेज है जो L-मेथियोनीन के गामा-कार्बन-सल्फर बॉन्ड को मिथाइलथिओल से अलग करता है और डीमिनेटेड समग्र उत्पाद α-कीटोब्यूटिरेट बनाता है। हम पाते हैं कि एंजाइम की अधिकता की स्थिति में बहिर्जात 3H-L-2-एमिनोब्यूटिरेट को 3H-α-कीटोब्यूटिरेट में डीमिनेट नहीं किया जाता है, जो L-मेथियोनीन अपचय के दौरान बंधे हुए मध्यवर्ती (ओं) के कुशल हस्तांतरण का समर्थन करता है। L-मेथियोनीन से α-कीटोब्यूटिरेट बनाने की समग्र प्रतिक्रिया Km 1.0 mM, Vmax 5.27 μmol min-1 mg-1, और मोनोमेरिक kcat/Km 3729.3 M-1 s-1 प्रदर्शित करती है। Mgld pH 8 से ऊपर और 37°-50°C के तापमान रेंज में इष्टतम गतिविधि प्रदर्शित करता है। Mgld अवरोध के लिए कई यौगिकों का परीक्षण किया गया। प्राकृतिक उत्पाद DL-प्रोपार्गिलग्लाइसिन सबसे प्रभावी Mgld अवरोधक के रूप में सामने आता है और इस प्रकार यह मुंह की दुर्गंध के नियंत्रण के लिए उपयोगी हो सकता है। Mgld की N-फॉर्मिलमेथियोनीन पर लगभग कोई क्रियाशीलता नहीं होती, जिससे एंजाइम के साथ शिफ बेस बनाने के लिए सब्सट्रेट पर मुक्त α-एमिनो-नाइट्रोजन की आवश्यकता की पुष्टि होती है।