एकल कोशिका जीव विज्ञान

अमूर्त

सीएफटीआर के एकल उत्परिवर्तन के बहु-कार्यात्मक परिणाम, कार्यात्मक परीक्षणों द्वारा उत्परिवर्तनों का विश्लेषण करने का महत्व

लेडेवेज़ वी, फ़रहत आर, एल सीडी ए और किट्ज़िस ए

सिस्टिक फाइब्रोसिस कोकेशियान आबादी में सबसे अधिक बार होने वाली दुर्लभ बीमारी है। यह गंभीर वंशानुगत अप्रभावी बीमारी सिस्टिक फाइब्रोसिस ट्रांसमेम्ब्रेन कंडक्टेंस रेगुलेटर (CFTR) जीन में उत्परिवर्तन के कारण होती है। यह जीन उपकला कोशिकाओं की शीर्ष झिल्ली पर व्यक्त प्रोटीन के लिए एन्कोड करता है । उत्परिवर्तनों को उनके प्रभावों और फेनोटाइप गंभीरता के आधार पर छह वर्गों में वर्गीकृत किया जाता है। F508डेलम्यूटेशन CFTR जीन का सबसे अधिक बार होने वाला उत्परिवर्तन है; यह प्रोटीन के गलत तह को प्रेरित करता है जिससे इसकी परिपक्वता, झिल्ली स्थानीयकरण और अंत में, इसकी कार्यक्षमता अवरुद्ध हो जाती है।

यह अध्ययन c.1392G>T (p.Lys464Asn) CFTR एक्सॉन 10 उत्परिवर्तन के फिजियोपैथोलॉजिकल परिणामों को निर्धारित करने के लिए एक नैदानिक ​​दृष्टिकोण और कई स्तरीय सेलुलर विश्लेषणों को जोड़ता है, जो एक CF रोगी में ट्रांस में फ्रेम शिफ्ट विलोपन और सिस में एक TG(11)T(5) के साथ पाया गया था। सबसे पहले, c.1392G>T के परिणाम को निर्धारित करने के लिए अलग-अलग TG(m)T(n) एलील और नाक सेल mRNA अर्क के साथ मिनिजीन प्रयोगों द्वारा स्प्लिसिंग का अध्ययन किया गया था। फिर, वेस्टर्न ब्लॉटिंग विश्लेषण द्वारा, सेल्यूलो में p.Lys464Asn प्रोटीन के प्रसंस्करण का मूल्यांकन किया गया।

c.1392G>T उत्परिवर्तन एक्सॉन 10 स्प्लिसिंग को प्रभावित करता है, इसके पूर्ण विलोपन को प्रेरित करके और फ्रेम शिफ्ट ट्रांसक्रिप्ट को एनकोड करके। बहुरूपता TG (11)T(5) इस उत्परिवर्तन के प्रभाव को असामान्य स्प्लिसिंग पर बढ़ाता है, जो जटिल एलील के महत्व का सुझाव देता है। मातृ वायुमार्ग उपकला कोशिकाओं से प्राप्त mRNA के विश्लेषण ने सेल्यूलो परिणामों में इनकी पुष्टि की। प्रोटीन स्तर पर p.Lys464Asn प्रोटीन ने कोई पूर्ण ग्लाइकोसिलेटेड रूप नहीं दिखाया।

इस प्रकार, अकेले या पॉली टी ट्रैक्ट के साथ मिलकर c.1392G>T उत्परिवर्तन ने स्प्लिसिंग और CFTR प्रोटीन प्रसंस्करण पर स्पष्ट प्रभाव प्रकट किया। c.[T(5); 1392G>T] जटिल एलील स्प्लिसिंग को प्रभावित करके और एक गंभीर मिसप्रोसेसिंग दोष को प्रेरित करके CF फेनोटाइप में योगदान देता है । ये परिणाम दर्शाते हैं कि शास्त्रीय CFTR उत्परिवर्तन वर्गीकरण पर्याप्त नहीं है: एक मरीज में संभावित जटिल एलील के इन विवो और इन सेल्यूलो अध्ययनों को सही CFTR उत्परिवर्तन वर्गीकरण, पर्याप्त चिकित्सा परामर्श और अनुकूलित चिकित्सीय रणनीति प्रदान करने की आवश्यकता है।