क्लिनिकल एवं मेडिकल बायोकैमिस्ट्री

अमूर्त

छिटपुट स्तन कैंसर में RASSF1 जीन मिथाइलेशन और mRNA अभिव्यक्ति का आणविक विश्लेषण

मारिया लागियोउ, निकोलेटा पॉमपोरिडौ, निकोलाओस गौटास, दिमित्रियोस व्लाचोदिमित्रोपोलोस, एग्गेलिकी पप्पा, एवी लियानिदौ, ट्रायंटाफिलोस लिलोग्लू और क्रिस्टोस क्रुपिस

परिचय: इस अध्ययन का उद्देश्य RASSF1 जीन के पहले प्रमोटर (जहां से स्तन ऊतक में इसका प्राथमिक प्रतिलेख RASSF1A प्रतिलेखित होता है) के डीएनए मिथाइलेशन का अध्ययन करने के लिए अभिनव और विश्वसनीय तरीकों को मान्य करना, इसकी mRNA अभिव्यक्ति और छिटपुट स्तन कैंसर में उनका मूल्यांकन करना था। सामग्री और विधियाँ: ज्ञात हिस्टोपैथोलॉजिकल डेटा के साथ 81 जमे हुए स्तन कैंसर ऊतकों से डीएनए और आरएनए के साथ-साथ 4 सामान्य स्तन ऊतकों का विश्लेषण किया गया। डीएनए मिथाइलेशन के स्तर का आकलन पायरोसीक्वेंसिंग द्वारा किया गया, जिसमें पहले RASSF1 प्रमोटर के CpG द्वीप में 9 CpG डाइन्यूक्लियोटाइड का विश्लेषण किया गया। mRNA अभिव्यक्ति के लिए, एक वास्तविक समय RT-qPCR विधि का उपयोग किया गया और सभी RASSF1 प्रतिलेख वेरिएंट (G को छोड़कर) के लिए SYBR ग्रीन PCR किट और मानकीकृत प्राइमरों (Qiagen) के एक उपयुक्त सेट के साथ सिंथेटिक मानकों के साथ मान्य किया गया। RASSF1 अभिव्यक्ति के सापेक्ष परिमाणीकरण के लिए, संदर्भ जीन के रूप में बीटा2-माइक्रोग्लोब्युलिन के साथ 2-ΔCt विधि का उपयोग किया गया। परिणाम: 59 नमूनों को RASSF1 सामान्य रूप से मिथाइलेटेड (72.8%) के रूप में चिह्नित किया गया, जबकि 22 नमूनों को हाइपरमेथिलेटेड (27.2%) के रूप में चिह्नित किया गया। इसके अलावा, 40 नमूनों को RASSF1 mRNA ओवर-एक्सप्रेसिंग (49.4%) के रूप में वर्गीकृत किया गया, जबकि 41 (50.6%) को सब-एक्सप्रेसिंग के रूप में वर्गीकृत किया गया। मिथाइलेशन और RASSF1 अभिव्यक्ति (p=0.207) के बीच कोई व्युत्क्रम सहसंबंध नहीं पाया गया। लॉजिस्टिक रिग्रेशन ने दिखाया कि लिम्फ नोड घुसपैठ की संभावना नकारात्मक ER रिसेप्टर्स (p=0.008, OR 0.09, CI 0.14-0.52), मिथाइलेशन का प्रतिशत (p=0.006, OR 7.96, CI 1.82-34.86) और RASSF1 अभिव्यक्ति के स्तर (p=0.047, OR 3.94, CI 1.02-15.29) की उपस्थिति से बढ़ गई थी। उत्तरजीविता विश्लेषण से पता चला कि मेटास्टेसिस और mRNA RASSF1 अति-अभिव्यक्ति (लॉग रैंक टेस्ट, p=0.040) के बीच एक सीमांत सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण सहसंबंध है। निष्कर्ष: मूल्यांकित परख स्तन कार्सिनोमा के नैदानिक ​​प्रबंधन के लिए संभावित रूप से उपयोगी जानकारी प्रदान करते प्रतीत होते हैं। दूसरे RASSF1 प्रमोटर के मिथाइलेशन के लिए एक समान विश्वसनीय परख का मूल्यांकन भविष्य में किया जाना चाहिए। अभिव्यक्ति अध्ययन के संबंध में, सभी अलग-अलग RASSF1 प्रतिलेखों के लिए विशिष्ट जांच के साथ एक नई डिजाइन रणनीति, अध्ययन में अतिरिक्त शक्ति प्रदान करेगी और छिटपुट स्तन कैंसर के नैदानिक ​​मूल्यांकन में नए RASSF1 बायोमार्कर के उपयोग को सशक्त बनाएगी।