जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

भ्रूण स्टेम सेल विभेदन में शामिल जीन की पहचान के लिए लाइन-1 आधारित इंसर्शनल म्यूटेजेनेसिस स्क्रीन

सुंग-हुन ली और डैनी रंगासामी

पृष्ठभूमि: चिकित्सीय उद्देश्यों के लिए इन कोशिकाओं का उपयोग करने की संभावना को वास्तविकता बनाने से पहले भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के आंतरिक गुणों का ज्ञान आवश्यक है। विशेष फेनोटाइप प्रदान करने के लिए पर्याप्त जीन की पहचान करने के लिए इंसर्शनल म्यूटेनेसिस स्क्रीन का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है; हालाँकि, इस तरह के तरीकों के अनुप्रयोग माउस मॉडल तक ही सीमित हैं। इस प्रकार, एक नया डीएनए ट्रांसपोसोन सिस्टम विकसित करने की आवश्यकता है जो स्टेम कोशिकाओं में जीन खोज दृष्टिकोण की अनुमति देता है।
विधियाँ: यह अध्ययन माउस भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के रखरखाव और भेदभाव में शामिल जीन की पहचान करने के लिए जीन ट्रैप वेक्टर के रूप में लंबे समय तक फैले परमाणु तत्व 1 (LINE -1) रेट्रोट्रांसपोसोन का उपयोग करने की संभावना का पता लगाने के लिए किया गया था।
परिणाम: हमने अपने वेक्टर की रीढ़ में स्कैफोल्ड/मैट्रिक्स अटैचमेंट क्षेत्रों का उपयोग करके एक एपीसोमल, नॉनवायरल LINE-1 रेट्रोट्रांसपोसोन सिस्टम विकसित किया। यह जीन ट्रैप वेक्टर एक GFP मार्कर को आश्रय देता है जिसकी अभिव्यक्ति केवल सफल इंसर्शनल म्यूटेनेसिस के बाद होती है। इस वेक्टर का उपयोग करके, GFP अभिव्यक्ति के साथ युग्मित करके, हमने चार अलग-अलग भ्रूण स्टेम सेल क्लोनों को सफलतापूर्वक अलग किया है जो दो ज्ञात जीनों सहित बाधित जीन प्रदर्शित करते हैं। फिर हमने इन जीनों की पहचान एक व्युत्क्रम पीसीआर दृष्टिकोण का उपयोग करके पुष्टि की और shRNAs और भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के अविभेदित मार्करों का उपयोग करके सेल भेदभाव में उनके कार्य को सत्यापित किया ।
निष्कर्ष: इस इंसर्शनल म्यूटेजन का उपयोग करने की आसानी और GFP अभिव्यक्ति द्वारा बाधित जीन वाली कोशिकाओं की पहचान करने की सरलता इस LINE-1 वेक्टर को भ्रूण स्टेम सेल और कैंसर स्टेम सेल जीन खोज के लिए एक आशाजनक उपकरण बनाती है।