एकल कोशिका जीव विज्ञान

अमूर्त

गॉसिपियम हिर्सुटम गुणसूत्र प्रतिस्थापन लाइनों से व्यक्तिगत रूप से पृथक युग्मकों की जीनोटाइपिंग

अहमद नसीर अज़ीज़*, अब्दुल मुजीद याकूब और शेर्या सिंह हमाल

अमेरिकी कृषि सुरक्षा और संधारणीय कृषि के लिए एक महत्वपूर्ण फसल के रूप में, कपास आनुवंशिक सुधार के लिए अभिनव विश्लेषणात्मक उपकरणों के विकास की आवश्यकता है। व्यक्तिगत युग्मकों पर आधारित आनुवंशिक विश्लेषण न्यूनतम नमूना आवश्यकता, नर माता-पिता की आनुवंशिक पहचान और माइक्रोस्पोर्स की अगुणित प्रकृति के कारण पॉलीप्लोइडी की जटिलता पर काबू पाने सहित कई लाभ प्रदान करते हैं। इस शोध में जी. हिर्सुटम पृष्ठभूमि में जी. बारबाडेंस गुणसूत्र 17 और 25 के साथ टेट्राप्लोइड कपास (जी. हिर्सुटम x जी. बारबाडेंस) गुणसूत्र प्रतिस्थापन (सीएस) लाइनों का उपयोग किया गया। व्यक्तिगत रूप से पृथक किए गए पराग कणों को उनके डीएनए को छोड़ने के लिए अंकुरित किया गया और मास्टरएम्प™ एक्स्ट्रा-लॉन्ग पीसीआर किट (ईपीआईसीएंट्रे®, मैडिसन, WI) का उपयोग करके संशोधित प्राइमर एक्सटेंशन प्री-एम्पलीफिकेशन (पीईपी) द्वारा जीनोमिक डीएनए को बढ़ाया गया। इसके अलावा, चुनिंदा कपास लाइनों से, टेट्राड विकासात्मक चरण से मुक्त हुए माइक्रोस्पोर्स को अलग-अलग अलग किया गया और गेमेट डीएनए को निकाला गया और साथ ही साथ REPLI-g सिंगल सेल किट (QIAGEN, वेलेंसिया, CA) का उपयोग करके मल्टीपल डिस्प्लेसमेंट एम्पलीफिकेशन (MDA) के माध्यम से प्रवर्धित किया गया। PEP और MDA प्रवर्धित व्यक्तिगत गेमेट DNA के साथ पैतृक नमूनों का विश्लेषण तब सरल अनुक्रम पुनरावृत्ति (SSR) के साथ-साथ IRD800 और IRD-700 लेबल (Li-Cor, Lincoln, NE) प्रवर्धित खंड लंबाई बहुरूपता (AFLP) विधियों का उपयोग करके किया गया। TM-1, 3-79, CS-B17 और CS-B25 कपास लाइनों का विश्लेषण करने के लिए उन्नीस SSR और 28 AFLP प्राइमर जोड़े का उपयोग किया गया। परिपक्व पराग के साथ-साथ शुरुआती मुक्त माइक्रोस्पोर नमूनों से पैतृक SSR और AFLP मार्करों के प्रवर्धन ने क्रमशः एगरोज़ और पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके तुलनात्मक आनुवंशिक अध्ययन के लिए अद्वितीय उपकरण प्रदान किए।