जर्नल ऑफ़ स्टेम सेल रिसर्च एंड थेरेपी

अमूर्त

भ्रूण स्टेम कोशिकाओं में हृदय वंशावली विशिष्टता के लिए डीजीसीआर8 अपरिहार्य है

ज़ियोंग लेई, एलेन वैन मिल, एनेबेल एम वैन डे व्रुगट, पीटर ए डोवेन्डन्स और जोस्ट पीजी स्लुइज्टर

उद्देश्य: माइक्रोआरएनए को कार्डियोजेनिक भेदभाव सहित सेलुलर व्यवहार और वंश विनिर्देश में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हुए दिखाया गया है। हालांकि, उचित सेलुलर मॉडल की कमी के कारण कार्डियोमायोसाइट भेदभाव में उनकी भूमिका की पूरी समझ बाधित हुई है। यहां, हमने एक भ्रूण स्टेम सेल (ESC) का उपयोग किया है जिसमें महत्वपूर्ण माइक्रोप्रोसेसर Dgcr8 (या पाशा) की कमी है, जो हृदय भेदभाव में उनकी भूमिका का अध्ययन करने और अधिक सटीक लक्ष्य चयन के लिए व्यक्तिगत miRNAs के परिचय की अनुमति देता है।
विधियाँ: Dgcr8 KO ESC को माउस भ्रूण फाइब्रोब्लास्ट फीडर के साथ LIF-पूरक ESC माध्यम में संवर्धित किया गया था और भ्रूण शरीर-आधारित भेदभाव प्रोटोकॉल का उपयोग करके हृदय भेदभाव को प्रेरित किया गया था। इम्यूनोफ्लोरेसेंट धुंधलापन और अर्ध-मात्रात्मक पीसीआर का उपयोग करके कार्डियोजेनिक मार्करों और हेटरोक्रोमैटिन परिवर्तनों के mRNA और प्रोटीन स्तरों को मापकर भेदभाव की निगरानी की गई।
परिणाम और निष्कर्ष: हमने दिखाया कि Dgcr8 KO ESC में वास्तव में छोटे RNAs की एक बड़ी आबादी की कमी है, जिसमें परिपक्व माइक्रोRNAs शामिल हैं, लेकिन उन तक सीमित नहीं हैं। KO कोशिकाओं की प्रसार दर कम थी और वे हृदय वंश में विभेदित होने में असमर्थ थीं। हमारे आश्चर्य के लिए, माइक्रोआरएनए प्रसंस्करण में दोष के अलावा, Dgcr8 KO भ्रूण स्टेम कोशिकाएं उचित हेटरोक्रोमैटिन बनाने और जीनोटॉक्सिक सेंट्रोमेरिक दोहराव वाले तत्वों को निष्क्रिय करने में असमर्थ हैं। हमारे परिणाम तर्क देते हैं कि, माइक्रोआरएनए प्रसंस्करण को नियंत्रित करने के अलावा, Dgcr8 हेटरोक्रोमैटिन साइलेंसिंग में पहले से पहचानी नहीं गई भूमिका निभा सकता है।