जर्नल ऑफ बायोमोलेक्यूलर रिसर्च एंड थेरेप्यूटिक्स

अमूर्त

एन-हाइड्रोक्सीसल्फोसक्सीनिमाइड से जुड़े बायोटिन अभिकर्मकों द्वारा एंजियोटेंसिन II का जटिल एसाइलेशन

क्विनफेंग लियू, एंड्रेस लैम और अच्युत कथूरिया

एन-हाइड्रोक्सीसल्फोसक्सीनिमाइड-लिंक्ड बायोटिन (सल्फोएनएचएस-बायोटिन) पानी में घुलनशील बायोटिन टैग हैं जिनका उपयोग आम तौर पर प्राथमिक अमीनों के तेजी से एन-एसाइलेशन द्वारा प्रोटीन में बायोटिन के अंश को संयोजित करने के लिए किया जाता है। एंजियोटेंसिन II (एजी-II) के टायरोसिन पर सल्फोएनएचएसबायोटिन द्वारा अप्रत्याशित ओ-एसाइलेशन और तीसरे साइट पर एसाइलेशन की पहचान एलसी-एमएस द्वारा की गई थी, जो एजी-II के एन-टर्मिनल पर अपेक्षित एन-एसाइलेशन के अलावा विशेषता नहीं बता सकता था। एन-एसाइलेशन केवल 0.1% फॉर्मिक एसिड में अपूर्ण हाइड्रोलिसिस से गुजरता है, पीएच 7.2 और 8.0 पर नहीं, जबकि दो अप्रत्याशित एसाइलेशन दोनों स्थितियों में हाइड्रोलाइज करते हैं, लेकिन 0.1% फॉर्मिक एसिड में उनका हाइड्रोलिसिस बहुत अधिक तेज था। डिथियोथ्रेइटोल उपचार ने अप्रत्याशित एसाइलेशन के दोनों के हाइड्रोलिसिस को चुनिंदा रूप से उत्प्रेरित किया, लेकिन एजी-II के एन-एसाइलेशन को नहीं। Ag-II टायरोसिन के O-एसाइलेशन की अधिकतम उपज pH 7.2 पर 99% और pH 8.0 पर 95% थी, जबकि लाइसिन के N-एसाइलेशन की तुलना में जब सल्फोएनएचएस-बायोटिन की अधिकता के साथ प्रतिक्रिया की गई तो pH 7.2 पर 94% और pH 8.0 पर 96% उपज मिली। Ag-II के तीसरे अनिर्दिष्ट स्थल के एसाइलेशन ने pH 7.2 पर लगभग 17% की अधिकतम उपज दिखाई, लेकिन pH 8.0 पर 30 मिनट के भीतर उच्च उपज (≥ 47%) दिखाई। Ag-II टायरोसिन का अप्रत्याशित O-एसाइलेशन pH 7.2 या pH 8.0 पर 1 मिनट के भीतर हुआ, जो N-एसाइलेशन जितना ही तेज़ था, जबकि दूसरे अप्रत्याशित एसाइलेशन को pH 8.0 पर पूरा होने में अधिक समय लगा।