जर्नल ऑफ माइक्रोबियल एंड बायोकेमिकल टेक्नोलॉजी

अमूर्त

एस्चेरिचिया कोली का तेजी से पता लगाने के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और मल्टीएंजाइम प्रतिबंध खंड लंबाई बहुरूपता विश्लेषण का संयोजन

अकीफुमी होसोदा, अराता कोमाबा, मिचिरु किशिमोतो और हिरोतो तमुरा

खाद्य पदार्थों में रोगजनक सूक्ष्मजीवों की निगरानी के लिए खेती के तरीकों का उपयोग किया जाता है। हालाँकि, मौजूदा तरीकों से परिणाम प्राप्त करने में कुछ दिन लगते हैं, और सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण के परिणाम उपलब्ध होने से पहले ही उत्पादों को अक्सर बिक्री के लिए जारी कर दिया जाता है। हमने एस्चेरिचिया कोली K-12 और O157:H7 (GTC 14536) (0 CFU/g और 1×101–104 CFU/g) से टीका लगाए गए मॉडल खाद्य नमूनों का उपयोग करके एक RNA निष्कर्षण और सूक्ष्मजीव पहचान प्रणाली विकसित की है। RNA निष्कर्षण से पहले, जीवित या मृत कोशिकाओं को खाद्य नमूनों में टीका लगाया गया था, नमूनों को समरूप बनाया गया था, और निकाले गए RNA का उपयोग यादृच्छिक 6-mer का उपयोग करके cDNA को संश्लेषित करने के लिए किया गया था। लक्ष्य जीन का विश्लेषण करने के लिए PCR का उपयोग किया गया था, और प्रतिबंध खंड लंबाई बहुरूपता (RFLP) का विश्लेषण करने के लिए PCR उत्पादों को दो प्रतिबंध एंजाइमों (HhaI और HaeIII) के साथ पचाया गया था। PCR ने जीवित कोशिकाओं के 1×101 CFU/g नमूनों तक के RNA निष्कर्षण और cDNA संश्लेषण की पुष्टि की। मल्टीएंजाइम आरएफएलपी (MeRFLP) ने दिखाया कि प्राप्त डीएनए टुकड़ों के आकार सैद्धांतिक टुकड़े के आकार के अनुरूप थे, जो यह सुझाव देते हैं कि रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-MeRFLP (RT-MeRFLP) लक्ष्य बैक्टीरिया की पहचान कर सकता है। ये परिणाम बताते हैं कि RT-MeRFLP, जिसके लिए कल्चर की आवश्यकता नहीं होती है और जिसे 6.5 घंटे के भीतर पूरा किया जा सकता है, भोजन में बैक्टीरिया की पहचान करने के लिए कम लागत वाली, तेज़ और विश्वसनीय प्रणाली के लिए एक आशाजनक दृष्टिकोण है।