जर्नल ऑफ माइक्रोबियल एंड बायोकेमिकल टेक्नोलॉजी

अमूर्त

ई. कोली में जैविक रूप से सक्रिय पुनः संयोजक मानव वृद्धि हार्मोन की अरबीनोज प्रमोटर आधारित अभिव्यक्ति: अति अभिव्यक्ति के लिए रणनीतियां और सरल शुद्धिकरण विधियां

सुधीरबाबू सूरापानेनी, अंजलि आप्टे-देशपांडे, केतकी सबनीस-प्रसाद, जितेंद्र कुमार, वीणा ए रायकर, प्रकाश कोटवाल और श्रीराम पद्मनाभन

पुनः संयोजक मानव विकास हार्मोन (आरएचजीएच) के उत्पादन और शुद्धिकरण के लिए ई. कोली में एक अरबीनोज प्रमोटर आधारित अभिव्यक्ति प्रणाली को डिजाइन और कार्यान्वित किया गया था। शेक फ्लास्क अध्ययनों ने मूल पीबीएडी24 वेक्टर की तुलना में संशोधित पीबीएडी24 वेक्टर (पीबीएडी24एम) में व्यक्त आरएचजीएच की सराहनीय मात्रा का संकेत दिया। जबकि बायोरिएक्टर में पीबीएडी24 के साथ आरएचजीएच का स्तर केवल 75 मिलीग्राम एल ^-1 तक पहुंच गया, यह सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस-पीएजीई) द्वारा हल किए गए प्रोटीन के डेंसिटोमेट्री द्वारा निर्धारित समान परिस्थितियों में पीबीएडी24एम वेक्टर के साथ ~1860 मिलीग्राम एल ^-1 तक पहुंच गया। यूरिया विकृतीकरण के बाद दो सरल आयन-एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी चरणों द्वारा समावेशन निकायों से आरएचजीएच प्रोटीन को सफलतापूर्वक शुद्ध किया गया, जिसमें 40% की कुल रिकवरी हुई, जो शुद्ध एचजीएच के ~ 750 मिलीग्राम एल ^-1 के बराबर है, जो आज तक शुद्ध आरएचजीएच की उच्चतम रिपोर्ट की गई उपज है। इस तरह के शुद्ध बैक्टीरिया से प्राप्त आरएचजीएच को एन-टर्मिनल अनुक्रम, सीडी स्पेक्ट्रा अध्ययन, मास फिंगरप्रिंट विश्लेषण और एजिलेंट 2100 बायोएनालाइजर पर विश्लेषण द्वारा चिह्नित किया गया था। शुद्ध आरएचजीएच की जैव सक्रियता व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एचजीएच (सोमैटोट्रोपिन) के बराबर थी।