जीन प्रौद्योगिकी

अमूर्त

एक्स-लिंक्ड माइक्रोआरएनए लोकस के सशर्त नॉकआउट के साथ मानव ट्यूमर कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए CRISPR/cas9-निर्देशित समजातीय पुनर्संयोजन का अनुप्रयोग

ऑरेली वैन टोंगेलेन, एक्सेल लोरीओट, ओलिवियर डी बैकर और चार्ल्स डी स्मेट

माइक्रोआरएनए के सेलुलर फ़ंक्शन का अध्ययन करने के लिए उनके कार्य-हानि को उत्पन्न करने के लिए आनुवंशिक रणनीतियों की आवश्यकता होती है। हाल ही में, लक्षित जीनोमिक विलोपन का एक नया तरीका प्रस्तावित किया गया था, जो कि Cas9/gRNA राइबोन्यूक्लियोप्रोटीन कॉम्प्लेक्स के साथ साइट-विशिष्ट डीएनए कट्स के प्रेरण पर आधारित है, जो कि क्रे-लोक्स या FLP-FRT सिस्टम के लिए अनुक्रम वाले कैसेट के समरूप पुनर्संयोजन-निर्भर सम्मिलन के साथ संयुक्त है। यहाँ, हम एक तकनीकी रिपोर्ट प्रदान करते हैं जो मानव ट्यूमर कोशिकाओं की पीढ़ी के लिए इस CRISPR/Cas9-निर्देशित समरूप पुनर्संयोजन प्रक्रिया के अनुप्रयोग का वर्णन करती है जिसमें माइक्रोआरएनए (miR-105/miR-767) के एक एक्स-लिंक्ड क्लस्टर के सशर्त नॉकआउट को प्रेरित किया जा सकता है। हम आनुवंशिक इंजीनियरिंग और सेल क्लोन चयन के क्रमिक चरणों का वर्णन करते हैं जिसने हमें अपेक्षित जीनोम संपादन के साथ कोशिकाओं को उत्पन्न करने की अनुमति दी।