जर्नल ऑफ़ प्लांट पैथोलॉजी एंड माइक्रोबायोलॉजी

अमूर्त

पीसीआर आधारित विविधता अध्ययन के लिए एस. रोल्फ्सी डीएनए निकालने की एक सरल और कुशल विधि

पुरुष एएस, काटो एफ और मुकनकुसी सीएम

स्क्लेरोटियम रॉल्फ़्सी से डीएनए निकालने की वर्तमान विधियाँ उच्च गुणवत्ता वाले डीएनए को निकालने के लिए बहुत सारे खतरनाक कार्बनिक रसायनों का उपयोग करती हैं। डीएनए का निष्कर्षण एक्सोपॉलीसेकेराइड्स द्वारा और भी जटिल हो जाता है जो डीएनए से बंध कर उसे चिपचिपा बना देते हैं। हमने एस. रॉल्फ़्सी से उच्च गुणवत्ता वाले डीएनए को निकालने के लिए एक सरल और कुशल प्रोटोकॉल विकसित किया है। हमारी विधि एक डीएनए निष्कर्षण बफर का उपयोग करती है जिसमें प्रोटीन को निष्क्रिय करने के लिए सोडियम डोडेसिल सल्फेट और प्रोटीनेज़ K होता है और एक्सोपॉलीसेकेराइड को अवक्षेपित करने के लिए उच्च नमक सांद्रता होती है। यह डीएनए निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान न तो फिनोल, क्लोरोफॉर्म और न ही आइसोमाइल अल्कोहल का उपयोग करता है। इसके लिए माइसिलिया को फ़्रीज़ ड्राई करने और लिक्विड नाइट्रोजन का उपयोग करके पीसने की भी आवश्यकता नहीं होती है। हमारी विधि का उपयोग करके, 100 मिलीग्राम माइसिलिया से पर्याप्त मात्रा में शुद्ध (औसत A260: A280=1.91 ± 0.001) डीएनए (औसत = 55.57 ± 0.002 एनजी/µl) प्राप्त किया गया। डीएनए इंटर-सिंपल सीक्वेंस रिपीट प्राइमर और एस. रॉल्फ्सी के आंतरिक ट्रांसक्राइब्ड स्पेसर क्षेत्र को लक्षित करने वाले प्राइमर का उपयोग करके पीसीआर प्रवर्धन के लिए अनुकूल था। हमारी विधि उन प्रयोगशालाओं में बहुत उपयोगी होगी जिनके पास लिक्विड नाइट्रोजन और फ़्रीज़ ड्राइंग सुविधाओं तक पहुँच नहीं है और यह आम बीन के इस महत्वपूर्ण रोगज़नक़ के पीसीआर-आधारित फ़ाइलोजेनेटिक अध्ययनों के लिए उत्प्रेरक होगी।